相关专利申请的交叉引用
本申请根据35u.s.c.的第119(e)条要求于2017年10月17日提交的美国临时申请号62/573,387的优先权，其全部内容通过引用纳入本文。
背景技术：
本发明的领域涉及维生素d化合物，更具体地说，涉及(22e)-2-亚甲基-22-脱氢-1α，24，25-三羟基-19-去甲-维生素d3类似物及其药物用途。特别地，本发明的领域涉及使维生素d化合物如(22e)-(24r)-2-亚甲基-22-脱氢-1α，24，25-三羟基-19-去甲-维生素d3结晶过程。
有机化合物，特别是指定用于药物用途的有机化合物的纯化对于合成此类化合物的化学家而言具有相当重要的意义。化合物的制备通常需要许多合成步骤，因此，最终产品不仅会被该程序最后一个合成步骤衍生的副产物污染，而且还会被先前步骤中形成的化合物污染。即使是非常高效但过程相对耗时的色谱纯化，通常也不能提供足够纯的化合物以用作药物。
取决于用于合成1α-羟基维生素d化合物的方法，最终的产物可能会伴随着不同的少量不想要的化合物。因此，例如，如果进行维生素d的5，6-反式几何异构体的直接c-1羟基化，然后进行seo2/nmo氧化和光化学照射，(参见andrews等，j.org.chem.51，1635(1986)；calverley等，tetrahedron43，4609(1987)；choudry等，j.org.chem.58，1496(1993))，最终的1α-羟基维生素d产物可能被1β-羟基-以及5，6-反式异构体污染。如果该方法由以下组成：将前维生素d化合物的4-苯基-1，2，4-三唑啉-3，5-二酮加合物进行c-1烯丙基氧化，然后在碱性条件下将改性的加合物裂环，(参见nevinckx等，tetrahedron47，9419(1991)；vanmaele等，tetrahedron41，141(1985)和40，1179(1994)；vanmaele等，tetrahedronlett.23.995(1982))，可以预期到所需的1α-羟基维生素会被前维生素5(10)，6，8-三烯和1β-羟基异构体所污染。广泛且有多种应用的最有用的c-1羟基化方法之一是由paaren等，j.org.chem.45，3253(1980)；和proc.natl.acad.sciu.s.a.75，2080(1978)详述的实验方式简单的过程。该方法由以下内容组成：用seo2/t-buooh对3，5-环维生素d衍生物的烯丙基氧化，该3，5-环维生素d衍生物很容易从维生素d甲苯磺酸盐的缓冲溶剂化中获得，然后进行酸催化的环裂成所需的1α-羟基化合物。考虑到该合成途径，合理的假设是最终产物可能被1α-羟基差向异构体，5，6-反式异构体和前维生素d形式污染。1α-羟基维生素d4是在由维生素d2或麦角固醇合成的1α-羟基维生素d化合物中发现的另一种不需要的污染物。1α-羟基维生素d4由维生素d4的c-1氧化产生，而维生素d4则源于商品麦角固醇材料的污染。通常，最终产物可包含至多约1.5重量％的1α-羟基维生素d4。因此，非常需要将最终产物中的1α-羟基维生素d4消除或基本上减少至小于约0.1-0.2％的纯化技术。
维生素d偶联的三烯系统不仅对热和光敏感，而且还易于氧化，产生非常极性化合物的复杂混合物。维生素d化合物长时间存储后通常会发生氧化。可能导致维生素d化合物部分分解的其他类型的过程包括一些除水反应。这些反应的驱动力是羟基的烯丙基(1α-)和高烯丙基(3β-)位置。上述氧化和消除产物的存在可以通过薄层色谱法容易地检测。
通常，所有1α-羟基化过程都需要至少一次色谱纯化。但是，即使对于色谱纯化的1α-羟基维生素d化合物，尽管显示出一致的表明均一性的光谱数据，但仍达不到可以口服，肠胃外或经皮给药的治疗剂所需的纯度标准。
因此，需要改善的维生素d化合物的纯化程序，例如结晶程序。在此，本发明人公开了使(22e)-(24r)-2-亚甲基-22-脱氢-1α，24，25-三羟基-19-去甲-维生素d3结晶的方法。
技术实现要素：
本文公开了纯化另外称为“wt-51”的(22e)-(24r)-2-亚甲基-22-脱氢-1α，24，25-三羟基-19-去甲-维生素d3的方法，其通过结晶以获得晶体形式的wt-51。
所公开的结晶方法利用溶剂溶解wt-51。溶剂在结晶过程中起重要作用，并且通常是单独的液体物质或不同液体的合适混合物。为了结晶wt-51，最合适的溶剂和/或溶剂体系的特征在于以下因素：(1)低毒性；(2)低沸点(例如，低于约100、90或80℃)；(3)溶解性相对于温度的显著依赖性(提供令人满意的结晶产率的必要条件)；和(4)成本相对较低。
有趣的是，发现乙酸乙酯和己烷的混合物是用于wt-51结晶的合适溶剂。特别地，已确定约20％至约30％乙酸乙酯(v/v)与约80％至约70％己烷(v/v)的混合物是用于wt-51结晶的合适溶剂。在公开的方法中，首先将wt-51溶解在乙酸乙酯中，并逐滴加入己烷以达到饱和点。在室温下放置后，约1小时后wt-51晶体开始生长。乙酸乙酯/己烷溶剂混合物也易于通过蒸发或其他众所周知的方法除去。沉淀的晶体足够大以确保通过过滤或其他手段回收，因此适合用于x射线衍射分析。
因此，本发明以晶体形式提供了具有下式的化合物：
更具体地，该化合物可以被称为晶体形式的(22e)-(24r)-2-亚甲基-22-脱氢-1α，24，25-三羟基-19-去甲-维生素d3或“wt-51”。
wt-51的晶体形式可以配制成包含wt-51的晶体形式和合适运载体的药物组合物。可以将药物组合物给予有此需要的对象以治疗多种被维生素d化合物治疗和/或预防的病症。
在一些实施方式中，本文公开的wt-51的晶体形式可以用于治疗和/或预防有此需要的对象的皮肤疾病，病症和病状的方法。这些可包括但不限于牛皮癣，痤疮，皮肤不够紧致，皮肤水合作用不足以及皮脂分泌不足。
在进一步的实施方式中，本文公开的wt-51的晶体形式可以用于治疗和/或预防有此需要的对象的细胞增殖性疾病或病症例如癌症的方法。这些可包括但不限于白血病，结肠癌，乳腺癌，皮肤癌和前列腺癌。
在更进一步的实施方式中，本文公开的wt-51的晶体形式可以用于治疗和/或预防有此需要的对象的自身免疫疾病和病症的方法。这些可包括但不限于多发性硬化症，糖尿病，狼疮，宿主抗移植物反应以及移植排斥。
在更进一步的实施方式中，本文公开的wt-51的晶体形式可以用于治疗和/或预防炎性疾病的方法。这些可包括但不限于类风湿性关节炎，哮喘和炎症性肠病。wt-51的晶体形式可专门用于治疗或预防包括克罗恩氏病和溃疡性结肠炎在内的炎症性肠病。
在更进一步的实施方式中，本文公开的wt-51的晶体形式可以用于治疗和/或预防肥胖，抑制脂肪细胞分化，抑制scd-1基因转录和/或减少体脂的方法。
附图说明
图1是如本文中发现和阐述的原子位置参数所定义的wt-51的三维分子结构的一个实施方式的图示。
图2是如本文中发现和阐述的原子位置参数所定义的wt-51的三维分子结构的一个实施方式的图示。
图3是如本文中发现和阐述的原子位置参数所定义的wt-51的三维分子结构的一个实施方式的图示。
图4是如本文中发现和阐述的原子位置参数所定义的wt-51的三维分子结构的图示。
发明详述
可以利用如下定义的术语进一步描述所公开的主题。
除非上下文另外指定或说明，否则术语“一个”，“一种”和“该”表示“一个(种)或多个(种)”。例如，短语“一种化合物”和“一种类似物”应分别解释为“一种或多种化合物”和“一种或多种类似物”。
如本文中所使用，“约”，“大约”，“基本上”和“显著”将被本领域普通技术人员理解，并且在使用它们的上下文中将在某种程度上变化。如果在给定使用上下文的情况下使用的术语对本领域普通技术人员而言尚不清楚，则“约”和“大约”表示特定术语的正负≤10％，并且“基本上”和“显著”是指该特定术语的正负＞10％。
如本文所使用，术语“包括”和“包含”具有与术语“含有”和“含”相同的含义。过渡术语“包含”应被解释为“开放式”，使得利用术语“包含”的权利要求应被解释为要求所列举的组分，但被允许包括其他额外组分。过渡术语“基本上由……组成”应解释为“部分封闭”，这样利用术语“基本上由……组成”的权利要求应解释为要求所列举的组分，并且仅允许不实质性影响所要求保护的主题的基本和新颖性特征的其他额外组分。过渡术语“由……组成”应被解释为“封闭的”，使得利用术语“由……组成”的权利要求应被解释为要求所列举的组分并且不允许其他额外组分。
如本文所用，术语“天然激素”和“1α，25(oh)2d3”可以互换使用。
如本文所用，化合物“wt-51”是指(22e)-(24r)-2-亚甲基-22-脱氢-1α，24，25-三羟基-19-去甲-维生素d3。例如，在美国专利号9,416,102中公开了用于合成wt-51的方法，该专利的内容通过引用全文纳入本文。
如本文所公开的，wt-51的晶体形式可以用于治疗和/或预防有此需要的对象的疾病或病症。术语“对象”，“患者”和“个体”在本文可以互换使用。
有此需要的对象可包括任何动物。所述动物可以是人，诸如狗或猫的家畜或农用动物，特别是那些提供人类食用的肉的动物，例如诸如鸡，火鸡，野鸡或鹌鹑的禽类，以及牛，绵羊，山羊或猪。
有此需要的对象可以指患有与维生素d活性有关的疾病或病症或有患上该疾病或病症的风险的对象。例如，有此需要的对象可以包括患有骨疾病和病症或有患上骨疾病和病症的风险的对象，其可包括其中希望增加骨量的代谢性骨疾病和疾患，例如骨质疏松症(例如，老年性骨质疏松症，绝经后骨质疏松症，类固醇诱发的骨质疏松症和骨转换率低的骨质疏松症)，骨质减少和骨软化症。有此需要的对象还可包括需要增加骨强度的对象。
有此需要的对象可以包括患有皮肤疾病，病症和病状或有发展皮肤疾病，病症和病状的风险的对象。这些可包括但不限于牛皮癣，痤疮，皮肤不够紧致，皮肤水合作用不足以及皮脂分泌不足。
有此需要的对象可以包括患有细胞增殖性疾病或病症例如癌症或有发展细胞增殖性疾病或病症例如癌症的风险的对象。这些可包括但不限于白血病，结肠癌，乳腺癌，皮肤癌和前列腺癌。
有此需要的对象可以包括患有自身免疫疾病和病症或有发展自身免疫疾病和病症的风险的对象。这些可包括但不限于多发性硬化症，糖尿病，狼疮，宿主抗移植物反应以及移植排斥。
有此需要的对象可包括患有炎性疾病或病症或有发展炎性疾病或病症的风险的对象。这些可包括但不限于类风湿性关节炎，哮喘和炎症性肠病。有此需要的对象可以包括患有克罗恩氏病和溃疡性结肠炎或有发展克罗恩氏病和溃疡性结肠炎的风险。
有此需要的对象可以包括患有肥胖症或有发展肥胖症的风险的对象。有此需要的对象可以包括需要或期望抑制脂肪细胞分化，抑制scd-1基因转录和/或减少体脂的对象。
有此需要的对象可以包括患有继发性甲状旁腺功能亢进症或有发展继发性甲状旁腺功能亢进症的风险的对象。特别地，有此需要的对象可包括患有肾性骨营养不良的继发性甲状旁腺功能亢进或有发展肾性骨营养不良的继发性甲状旁腺功能亢进的风险的对象。
为了预防和/或治疗目的，根据本领域已知的常规方法，可以将wt-51的晶体形式配制用于药物应用，如以在无害溶剂中的溶液形式，或在合适溶剂或运载体中的乳剂，混悬剂或分散剂，或丸剂，片剂或胶囊剂形式与固体运载体一起配制。任何此类制剂还可以包含其他药学上可接受的且无毒的赋形剂，例如稳定剂，抗氧化剂，粘合剂，着色剂或乳化剂或调味剂。
wt-51的晶体形式可以口服，局部，肠胃外，直肠，经鼻，舌下或透皮给药。该化合物有利地通过注射或通过静脉内输注或合适的无菌溶液，或以通过消化道的液体或固体剂量的形式，或以适合经皮应用的乳膏，软膏，贴剂或类似载剂的形式给药。
为了预防和/或治疗目的，每天0.01μg至1000μg的wt-51晶体形式的剂量，优选每天约0.1μg至约500μg的剂量是合适的，如本领域众所周知的，这种剂量根据待治疗的疾病，其严重程度和对象的反应而调整。因为该化合物表现出作用的特异性，所以在不同情况下，可以分别单独给药，也可以与分级剂量的另一种活性维生素d化合物(例如1α-羟基维生素d2或d3或1α，25-二羟基维生素d3)一起适当给药，在发现不同程度的骨矿物质动员和钙转运刺激有利的情况下。
用于上述治疗的组合物包含有效量的wt-51的晶体形式作为活性成分和合适的运载体。用于本发明的这类化合物的有效量为每克组合物约0.01μg至约1000μg，优选每克组合物约0.1μg至约500μg，并且可以约0.01μg/天至约1000μg/天，优选约0.1μg/天至约500μg/天的剂量局部，透皮，口服，直肠，经鼻，舌下或胃肠外给药。
因此，本发明的制剂包含与药学上可接受的运载体结合的活性成分以及任选的其他治疗成分。在与制剂的其他成分相容并且对接受者无害的意义上，运载体必须是“可接受的”。
适用于口服给药的本发明制剂可以是离散单位的形式，如胶囊，小袋，片剂或锭剂，每个均包含预定量的活性成分，例如以结晶粉末或结晶颗粒的形式。
所述制剂可以方便地以剂量单位形式存在，并且可以通过药学领域公知的任何方法制备。术语“剂量单位”是指单一的，即能够以物理上和化学上稳定的单位剂量向对象给药的单一剂量，该单位剂量包含活性成分本身或其与固体或液体药物稀释剂或运载体的混合物。
实施例
以下实施例是说明性的，无意于限制要求保护的主题的范围。
实施例1-(22e)-(24r)-2-亚甲基-22-脱氢-10α，24，25-三羟基-19-去甲-维生素d3(wt-51)的制备
如前所述，合成了(22e)-(24r)-2-亚甲基-22-脱氢-1α，24，25-三羟基-19-去甲-维生素d3(wt-51)。(参见美国专利号9,416,102，其内容通过引用全文纳入本文)。
(22e)-去-a，b-8β-苯甲酰氧基-24-氧代-25-[(三乙基甲硅烷基)氧基]-22-脱氢胆甾烷(3)。向搅拌的2(方案1；250mg；0.64mmol)在四氢呋喃(1.5ml)中的溶液中滴加1m六甲基二硅基胺基锂在四氢呋喃(700ml；0.70mmol)中的溶液。1小时后，通过套管加入11(200mg；0.64mmol)在四氢呋喃(1.5ml)中的溶液。将反应混合物搅拌3天。然后在0℃下加入饱和nh4cl水溶液(2ml)，盐水(2ml)和水(5ml)，所得混合物用二氯甲烷(3×50ml)萃取。有机相用无水na2so4干燥，减压浓缩，残余物通过柱色谱法纯化(2-5％乙酸乙酯/己烷)，得到200mg(0.39mmol；61％产率)的3。[α]d＝ 94.3(c1.1，chcl3)；1hnmr(400mhz，cdcl3)δ0.60(6h，q，j＝7.9hz)，0.95(9h，t，j＝7.9hz)，1.10(3h，s)，1.12(3h，d，j＝6.6hz)，1.34(6h，s)，2.04(2h，m)2.32(1h，m)，5.42(1h，brd，j＝1.9hz)，6.71(1h，d，j＝15.4hz)，6.84(1h，dd，j＝15.4hz，j＝8.6hz)，7.45(2h，t，j＝7.4hz)，7.56(1h，t，j＝7.4hz)，8.05(2h，d，j＝7.4hz)；13cnmr(101mhz，cdcl3)δ6.5，7.0，13.8，18.0，19.2，22.6，27.0，27.1，27.2，30.5，39.8，42.2，51.4，55.4，72.0，78.8，121.7，128.4，129.5，132.7，153.2，166.4，203.2；c31h49o4si([m h] )计算的精确质量(esi)513.3395，实际513.3405。
(22e)-去-a，b-8β-苯甲酰氧基-24-羟基-25-[(三乙基甲硅烷基)氧基]-22-脱氢胆甾烷(4，24-异构体的混合物)。在0℃下，向搅拌的3(200mg；0.39mmol)在四氢呋喃(1.5ml)和乙醇(4.5ml)中的溶液中添加cecl3x7h2o(298mg；0.80mmol)和nabh4(46mg；1.20mmol)。30分钟后，加入饱和nh4cl水溶液(2ml)和水(5ml)，混合物用二氯甲烷(3×40ml)萃取。有机相经无水na2so4干燥，减压浓缩，残余物通过柱色谱法纯化(5-15％乙酸乙酯/己烷)，得到180mg(0.35mmol；90％收率)的4，其为24-非对映异构体的混合物。c31h50o4sina([m na] )计算的精确质量(esi)537.3371，实际537.3380。
(22e)-去-a，b-8β-苯甲酰氧基-24，25-二-[(三乙基甲硅烷基)氧基]-22-脱氢胆甾烷(5，24-异构体的混合物)。在-50℃下向4(150mg；0.29mmol)和2，6-二甲基吡啶(67μl；62mg；0.58mmol)在二氯甲烷(1ml)中的搅拌溶液中逐滴加入三乙基甲硅烷基三氟甲磺酸酯(79μl；92mg；0.35mmol)。20分钟后，加入湿的二氯甲烷(1ml)和水(5ml)，混合物用二氯甲烷(3×25ml)萃取。有机相经无水na2so4干燥并减压浓缩。残留物经柱色谱纯化(己烷-3％乙酸乙酯/己烷)，得到165mg(0.26mmol；90％收率)的5。c37h64o4si2na([m na] )计算的精确质量(esi)651.4236，实际651.4234。
(22e)-去-a，b-24，25-二-[(三乙基甲硅烷基)氧基]-22-脱氢胆甾-8β-醇(6，24-异构体的混合物)。在0℃下，将5(160mg；0.25mmol)在四氢呋喃(3ml)中的溶液用3m甲基溴化镁在乙醚(750ul；2.25mmol)中的溶液处理5小时。小心地加入饱和nh4cl水溶液(2ml)，盐水(2ml)和水(5ml)，并将混合物用二氯甲烷(3×25ml)萃取。有机相经无水na2so4干燥并减压浓缩。将残余物在硅胶sep-pack柱上纯化(5-15％乙酸乙酯/己烷)，得到106mg(0.20mmol；81％收率)的6。c30h60o3si2na([m na] )计算的精确质量(esl)547.3974，实际547.3957。
(22e)-去-a，b-24，25-二-[(三乙基甲硅烷基)氧基]-22-脱氢胆甾-8-酮(7，24-异构体的混合物)。用重铬酸吡啶鎓盐(150mg；400μmo1)处理6(65mg；120μmo1)和对甲苯磺酸吡啶鎓(2晶体)在二氯甲烷(6ml)中的溶液3小时。将混合物在硅胶sep-pack柱上纯化(3-7％乙酸乙酯/己烷)，得到54mg(103μmol；86％)的7。c30h58o3si2na([m na] )计算的精确质量(esi)545.3817，实际545.3817。
(22e)-(24r)-2-亚甲基-22-脱氢-1α，24，25-三羟基-19-去甲-维生素d3(10，wt-51)和(22e)-(24s)-2-亚甲基-22-脱氢-1α，24，25-三羟基-19-去甲-维生素d3(11，wt-52)。在-25℃下，向搅拌的8(87mg；150μmol)在四氢呋喃(1.5ml)中的溶液中加入两滴1.8m苯基锂在二正丁基醚中的溶液，溶液变为深橙色。然后滴加化学计量的苯基锂溶液(78μl；140μmol)。20分钟后，将混合物冷却至-78℃，并通过套管转移7(53mg；101μmol)在四氢呋喃(0.75ml)中的溶液。将混合物搅拌2小时，温热至0℃，然后搅拌2小时。小心地加入饱和nh4cl水溶液(1ml)，盐水(1ml)和水(5ml)，并用己烷(3×25ml)萃取混合物。有机相经na2so4干燥并减压浓缩。将残余物在硅胶sep-pack柱上纯化(己烷-2％乙酸乙酯/己烷)，得到90mg粗品9。将粗品9溶于乙腈(2ml)中，并用(±)-樟脑-10-磺酸(40mg；172μmol)处理2天。将混合物在预先用10滴三乙胺处理过的硅胶sep-pack柱(10-30％2-丙醇/己烷)上纯化，以非对映异构体的混合物得到28mg(65μmol；从7产率为64％)的10和11。将混合物在hplc上分离(15％水/甲醇；zorbax-eclipsexdbc185μm；3.5ml/分钟；10的rt＝5.30分钟。11的rt＝5.80分钟)，得到9.5mg(22μmol；从7产率为22％)的10和13.5mg(31μmol；从7产率为31％)的11。11的x射线分析(图7)显示了24s构型。10：uv(etoh)xmax＝245，252，262nm；1hnmr(500mhz，cd3od)δ0.60(3h，s)，1.07(3h，d，j＝6.6hz)，2x1.13(3heach，s)，2.25-2.31(2h，m)，2.48(1h，dd，j＝13.4hz，j＝3.8hz)，2.66(1h，dd，j＝13.2hz，j＝4.3hz)，2.85(1h，dd，j＝12.2hz，j＝3.8hz)，3.73(1h，d，j＝7.4hz)，4.37(1h，m)，4.41(1h，m)，5.04(1h，s)，5.05(1h，s)，5.43(1h，dd，j＝15.4hz，j＝7.5hz)，5.52(1h，dd，j＝15.4hz，j＝8.6hz)，5.90(1h，d，j＝11.1hz)，6.26(1h，d，j＝11.1hz)；11：uv(etoh)λmax＝244，252，261nm；1hnmr(500mhz，cd3od)δ0.60(3h，s)，1.06(3h，d，j＝6.6hz)，1.12(3h，s)，1.13(3h，s)，1.65-1.70(2h，m)，1.79-1.83(1h，m)，1.93-2.07(2h，m)，2.13(1h，m)，2.25-2.31(2h，m)，2.48(1h，dd，j＝13.3hz，j＝3.9hz)，2.67(1h，dd，j＝13.2hz，j＝4.3hz)，2.85(1h，dd，j＝12.2hz，j＝3.7hz)，3.75(1h，d，j＝6.7hz)，4.37(1h，m)，4.41(1h，m)，5.04(1h，s)，5.06(1h，s)，5.45(1h，dd，j＝15.4hz，j＝6.9hz)，5.57(1h，dd，j＝15.4hz，j＝8.4hz)，5.90(1h，d，j＝11.1hz)，6.26(1h，d，j＝11.1hz)；ms(ei)m/z430(m ，10)，396(7)，253(22)，91(100)；c27h42o4na([m na] )计算的精确质量(esi)453.2976，实际453.2977。
方案i
方案i(续)
(i)lihmds，thf，61％；(ii)nabh4，cecl3×7h2o，etoh，thf，90％；(iii)tesotf，2，6-二甲基吡啶，ch2cl2，90％；(iv)memgbr，et2o，thf，81％；(v)pdc，ppts，ch2cl2，86％；(vi)phli，(n-bu)2o，thf；(vii)csa，mecn，22％10来自7，和33％11来自7。
实施例2-1-(二甲氧基磷酰基)-3-甲基-3-[(三乙基甲硅烷基)氧基]-2-丁酮的制备
3-甲基-3-[(三乙基甲硅烷基)氧基]-2-丁酮(13)。在-50℃下向3-羟基-3-甲基-2-丁酮(方案2；1.20ml；1.16g；11.4mmol)和2，6-二甲基吡啶(1.86ml；1.71g；16.0mmol)在二氯甲烷(30中)中的搅拌溶液中滴加三乙基甲硅烷基三氟甲磺酸酯(3.11ml；3.61g；13.7mmol)。20分钟后，加入湿的二氯甲烷(5ml)和水(50ml)，混合物用二氯甲烷(3×100ml)萃取。有机相经无水na2so4干燥并减压浓缩。残留物通过柱色谱法纯化(己烷-3％乙酸乙酯/己烷)，得到2.40g(10.4mmol；91％产率)的13。1hnmr(500mhz，cdcl3)δ0.63(6h，q，j＝7.9hz)，0.97(9h，t，j＝7.9hz)，1.33(6h，s)，2.23(3h，s)；13cnmr(126mhz，cdcl3)δ6.5，7.0，27.0，27.7，79.7，214.0；ms(ei)m/z216([m-et] ，100)，173(81)，172(30)115(68)，87(67)；c9h19o2si([m-et] )计算的精确质量(esi)187.1149，实际187.1144。
1-溴-3-甲基-3-[(三乙基甲硅烷基)氧基]-2-丁酮(14)。在0℃下，向13(2.40g；10.4mmol)和三乙胺(2.92ml；2.12g；21.0mmol)在二氯甲烷(50ml)中的搅拌溶液中滴加三乙基甲硅烷基三氟甲磺酸酯(2.37ml；2.75g；10.4mmol)。15分钟后，加入n-溴琥珀酰亚胺(2.05g；11.5mmol)，并除去冷却浴。30分钟后，加入饱和nh4cl水溶液(10ml)和水(50ml)，混合物用二氯甲烷(3×100ml)萃取。有机相经无水na2so4干燥并减压浓缩。残留物通过柱色谱法纯化(己烷-5％乙酸乙酯/己烷)，得到1.55g(5.25mmol；50％产率)的14。1hnmr(400mhz，cdcl3)δ0.64(6h，q，j＝7.9hz)，0.97(9h，t，j＝7.9hz)，1.41(6h，s)，4.44(2h，s)；13cnmr(101mhz，cdcl3)δ6.5，7.0，27.8，33.6，80.4，206.2；ms(ei)m/z294和296([m-et] ，24和23)，187(45)，173(100)；c9h18o2brsi([m-et] )计算的精确质量(esi)265.0254，实际265.0247。
1-(二甲氧基磷酰基)-3-甲基-3-[(三乙基甲硅烷基)氧基]-2-丁酮(2)。将14(1.55g；5.25mmol)和亚磷酸三甲酯(514ul；782mg；6.31mmol)在甲苯(20ml)中的溶液回流3天。混合物通过柱色谱法纯化(5-15％的2-丙醇/己烷)，得到1.54g(4.75mmol；90％产率)的2。1hnmr(400mhz，cdcl3)δ0.65(6h，q，j＝7.9hz)，0.98(9h，t，j＝7.9hz)，1.36(6h，s)，3.40(2h，d，jh-p＝20.7hz)3.80(6h，d，jh-p＝11.2hz)；13cnmr(101mhz，cdcl3)δ6.4，6.9，26.8，33.7(d，jc-p＝137.8hz)，52.8(d，jc-p＝6.7hz)80.0，207.1(d，jc-p＝6.0hz)；ms(ei)m/z324([m-et] ，98)，238(65)，211(61)，173(100)；c11h24o5psi([m-et] )计算的精确质量(esi)295.1126，实际295.1126。
方案ii
(i)tesotf，2，6-二甲基吡啶，ch2cl2，91％；(ii)tesotf，et3n，ch2cl2，nbs，50％；(iii)p(ome)3，phme，90％。
实施例3-(22e)-(24r)-2-亚甲基-22-脱氢-1α，24，25-三羟基-19-去甲-维生素d3(wt-51)的结晶和x射线衍射分析
(22e)-(24r)-2-亚甲基-22-脱氢-1α，24，25-三羟基-19-去甲-维生素d3(wt-51)从乙酸乙酯/己烷中结晶。将wt-51(15mg)置于4ml小瓶中，并溶于乙酸乙酯(0.3ml)中。接下来，逐滴添加己烷(1ml)以达到饱和点。然后将小瓶密封并置于室温。约1小时后，晶体开始生长，并将混合物在室温下另放置2天以获得晶体。滤出获得的晶体，并用少量乙酸乙酯/己烷洗涤，干燥，得到晶体wt-51。
实验。如此获得的晶体适用于x射线衍射分析，并据此进行了分析。(参见，例如，美国专利号9,212,137；9,040,729；8,940,916；8,884,039；8,519,169；8,420,839；和8,404,874；其内容通过引用全文纳入本文)。表1中提供了晶体数据和结构优化。表2中提供了原子坐标
在前面的描述中，对于本领域技术人员而言显而易见的是，在不脱离本发明的范围和精神的情况下，可以对本文公开的发明进行各种替换和修改。本文说明性地描述的本发明可以在不存在本文未具体公开的任何一个或多个元素，一个或多个限制的情况下适当地实践。已经采用的术语和表达用作描述性术语，而不是限制性的，并且不打算在使用这些术语和表达时排除所示出和描述的特征或其部分的任何等同形式，而是认识到在本发明的范围内可以进行各种修改。因此，应该理解，尽管已经通过特定实施方式和可选特征来说明本发明，但是本领域技术人员可以对本文公开的概念进行修改和/或变化，并且认为这样的修改和变化在本发明的范围内。
本文引用了许多参考文献。所引用的参考文献通过引用全文纳入本文。如果说明书中的术语定义与所引用的参考文献中的术语定义之间存在不一致的情况，则应基于说明书中的定义来解释该术语。
表1.晶体数据和结构优化
表2.原子坐标
u(eq)定义为正交化uij张量轨迹的三分之一
表3.键长度
表4.各向异性位移参数
表5.氢坐标
表6.扭转角[°]。
用于生成等效原子的对称变换：
1.一种晶体形式的具有下式的化合物
并且命名为(22e)-(24r)-2-亚甲基-22-脱氢-1α，24，25-三羟基-19-去甲-维生素d3。
2.(22e)-(24r)-2-亚甲基-22-脱氢-1α，24，25-三羟基-19-去甲-维生素d3的晶体形式，其分子组合排列由以下定义：空间群p21和晶胞尺寸：
3.如权利要求2所述的分子组合排列所定义的(22e)-(24r)-2-亚甲基-22-脱氢-1α，24，25-三羟基-19-去甲-维生素d3的三维结构。
4.一种纯化(22e)-(24r)-2-亚甲基-22-脱氢-1α，24，25-三羟基-19-去甲-维生素d3的方法，所述方法包括以下步骤：
(a)将(22e)-(24r)-2-亚甲基-22-脱氢-1α，24，25-三羟基-19-去甲-维生素d3溶解在作为溶剂的一定量的乙酸乙酯中制得(22e)-(24r)-2-亚甲基-22-脱氢-1α，24，25-三羟基-19-去甲-维生素d3的溶液；
(b)向溶液中滴加一定量的己烷，优选达到饱和点，以形成(22e)-(24r)-2-亚甲基-22-脱氢-1α，24,25-三羟基-19-去甲-维生素d3在作为溶剂的乙酸乙酯和己烷的混合物中的溶液，其中(22e)-(24r)-2-亚甲基-22-脱氢-1α，24，25-三羟基-19-去甲-维生素d3的晶体形成并从溶液中沉淀出来；并且
(c)从溶液中分离出(22e)-(24r)-2-亚甲基-22-脱氢-10，24，25-三羟基-19-去甲-维生素d3晶体。
5.如权利要求4所述的方法，其中将(22e)-(24r)-2-亚甲基-22-脱氢-1α，24，25-三羟基-19-去甲-维生素d3在作为溶剂的乙酸乙酯和己烷的混合物中的溶液置于室温下，其中(22e)-(24r)-2-亚甲基-22-脱氢-1α，24，25-三羟基-19-去甲-维生素d3的晶体形成并从溶液中沉淀出来。
6.如权利要求4所述的方法，其中所述分离步骤包括过滤所述混合物并沉淀以获得所述晶体。
7.如权利要求4所述的方法，包括另外的步骤(d)，所述步骤(d)包括在步骤(a)中使用从步骤(c)回收的(22e)-(24r)-2-亚甲基-22-脱氢-1α，24,25-三羟基-19-去甲-维生素d3的晶体重复步骤(a)至(c)。
8.如权利要求4所述的方法，其中乙酸乙酯和己烷的混合物按体积计包含约20-30％的乙酸乙酯和约70-80％的己烷。
9.一种药物组合物，其包含有效量的如权利要求1所述的化合物和药学上可接受的赋形剂。
10.一种在有此需要的对象中治疗或预防皮肤疾病，病症或病状的方法，所述方法包括向所述对象给予有效量的晶体形式的如权利要求1所述的化合物。
11.如权利要求10所述的方法，其中所述皮肤疾病，病症或病状是牛皮癣。
12.一种在有此需要的对象中治疗或预防细胞增殖性疾病或病症的方法，所述方法包括向所述对象给予有效量的如权利要求1所述的化合物。
13.如权利要求12所述的方法，其中所述细胞增殖性疾病或病症选自白血病，神经母细胞瘤，视网膜母细胞瘤，黑素瘤，结肠癌，乳腺癌和前列腺癌。
14.一种在有此需要的对象中治疗或预防自身免疫疾病或病症的方法，所述方法包括向所述对象给予有效量的如权利要求1所述的化合物，所述方法包括向所述对象给予有效量的晶体形式的如权利要求1所述的化合物。
15.如权利要求14所述的方法，其中所述自身免疫疾病或病症选自多发性硬化症，糖尿病，狼疮，宿主抗移植物反应和移植排斥。
16.一种在有此需要的对象中治疗或预防炎性疾病或病症的方法，所述方法包括向所述对象给予有效量的晶体形式的如权利要求1所述的化合物。
17.如权利要求16所述的方法，其中所述炎性疾病或病症选自类风湿性关节炎，哮喘和炎症性肠病。
18.如权利要求16所述的方法，其中所述炎性疾病或病症选自克罗恩氏病和溃疡性结肠炎。
19.一种在有此需要的对象中治疗或预防肥胖，抑制脂肪细胞分化，抑制scd-1基因转录和/或减少体内脂肪的方法，所述方法包括向对象给予有效量的晶体形式的如权利要求1所述的化合物。
技术总结