相关申请的交叉引用本申请要求于2017年7月10日提交的美国临时申请第62/530,463号和于2017年9月6日提交的美国临时申请第62/554,750号的权益，所述两个申请通过引用以其整体并入本文，包含任何附图和序列表。序列表参考本申请与电子格式的序列表一起提交。序列表以2018年7月3日创建的名为“sig794pct_st25txt”的文件提供，其大小为154kb。序列表的电子格式的信息通过引用以其整体并入本文。本发明涉及试剂，其结合在nk和/或其它免疫细胞中具有抑制活性的人siglec蛋白，并且中和此类siglec的抑制活性。此类试剂可以用于治疗癌症或传染病。
背景技术：
：nk细胞是在来自淋巴样祖细胞的骨髓中发育的单核细胞，并且形态学特征和生物学特性通常包含簇决定簇(cd)cd16、cd56和/或cd57的表达；细胞表面上不存在α/β或γ/δtcr复合物；结合并杀死不能表达“自身”主要组织相容性复合体(mhc)/人类白细胞抗原(hla)蛋白的靶细胞的能力；以及杀死表达活化nk受体的配体的肿瘤细胞或其它患病细胞的能力。nk细胞的特征在于它们能够结合并杀死几种类型的肿瘤细胞系，而无需事先免疫或活化。nk细胞还可以释放可溶蛋白和细胞因子，从而对免疫系统产生调节作用；并且可以经历多轮细胞分裂，并且产生具有与亲代细胞类似的生物学特性的子代细胞。正常、健康的细胞受到nk细胞的裂解保护。基于它们的生物学特性，本领域已经提出了依赖于nk细胞的调节的各种治疗和疫苗策略。然而，nk细胞活性受到涉及刺激和抑制信号两者的复杂机制的调节。简而言之，nk细胞的裂解活性受到各种细胞表面受体的调节，所述表面受体在与靶细胞上的配体相互作用后转导阳性或阴性细胞内信号。通过这些受体传递的正信号与负信号之间的平衡决定了nk细胞是否裂解(杀死)了靶细胞。nk细胞刺激信号可以由天然细胞毒性受体(ncr)，如nkp30、nkp44和nkp46；以及nkg2c受体、nkg2d受体、某些活化的杀伤性ig样受体(kir)和其它活化的nk受体介导(lanier，《免疫学年度评审(annualreviewofimmunology》2005；23:225-74)。nk细胞抑制信号可以由受体如cd94/nkg2-a，以及某些抑制kir介导，其识别主要组织相容性复合体(mhc)i类-分子(wagtmann等人(1995)《免疫力(immunity)》5:439-449)。这些抑制性受体结合其它细胞上存在的mhci类分子(包含hlai类)的多晶型决定簇，并且抑制nk细胞介导的裂解。nk细胞的裂解活性也可以由siglec多肽调节。siglecs(与唾液酸结合的免疫球蛋白样凝集素)是结合唾液聚糖的i型凝集素的亚群，并且主要以依赖于细胞类型和分化的方式在造血系统的细胞上表达。鉴于唾液酸无处不在地表达，通常在糖蛋白和脂质的末端位置处，而单独的siglec受体仅识别非常特定的独特的唾液聚糖结构，这取决于同一性和与亚末端碳水化合物部分的连接。siglecs仅对含有n-乙酰神经氨酸(neu5ac)α2-6和α2-3键的常见哺乳动物唾液酸结构的一般亲和力低。siglecs通常分为两组，第一个亚群由siglec-1、siglec-2、siglec-4和siglec-15组成，并且cd33相关的siglecs组包含siglec-3、siglec-5、siglec-6、siglec-7、siglec-8、siglec-9、siglec-10、siglec-11、siglec-12、siglec-14和siglec-16。cd33相关的siglecs的特征尤其在于低进化保守性和通过多种机制快速进化的序列。siglec-7(cd328)是一种1型跨膜蛋白，于1999年由意大利热那亚的moretta组首次克隆和表征，并且属于人cd33相关的siglec受体，其特征在于唾液酸结合n末端v集ig结构域、两个c2集ig结构域和胞质内区域，所述胞质内区域含有一个基于免疫受体酪氨酸的抑制性基序(itim)和一个itim样基序。siglec-7在nk细胞、树突细胞、单核细胞和嗜中性粒细胞上组成性表达。此受体的细胞外结构域优先结合(2,8)-连接的二唾液酸和分支的α2,6-唾液酸残基，如由神经节苷脂gd3展示的那些残基。siglec-9(cd329)在2000年由varki组表征(参见，例如angata等人《生物化学杂志(jbiolchem)》2000；275:22127–22135)，并且在单核细胞、嗜中性粒细胞、树突细胞、cd34 细胞和nk细胞上表达。已经发现siglec-9(以及siglec-8)对含有唾液酸和硫酸盐两者的唾液酸配体具有不同的特异性，其中硫酸盐的位置是特异性的重要决定因素。已经发现siglec-9结合在癌细胞上过表达的muc16。与siglec-7一样，siglec9也含有唾液酸结合n末端v集ig结构域、两个c2集ig结构域和胞质内区域，所述胞质内区域含有一个基于免疫受体酪氨酸的抑制性基序(itim)和一个itim样基序。人siglec-9的n-末端v集ig结构域与人siglec-7的n-末端v集ig结构域共有约77％的总体氨基酸序列同一性，并且这两个siglecs显示不同的唾液酸结合特异性。结合测定已经报道，与siglec-7类似，siglec-9在半乳糖的α2,3-或α2,6-糖苷键上识别唾液酸。使用siglec-9特异性mab，zhang等人((2000)《生物化学杂志(j.biol.chem.)》第275卷，第29期：22121–22126)报道发现siglec-9以高或中间水平由单核细胞、嗜中性粒细胞和cd16 、cd56-细胞的小群表达。然而，观察到～50％的b细胞和nk细胞以及cd8 t细胞和cd4 t细胞的亚群表达较弱。作者得出的结论是，尽管siglec-7和siglec-9具有高度的序列相似性，但是它们具有不同的表达谱。尽管siglec-9在nk和其它免疫细胞上有有趣的表达谱，并且在中和siglec-9方面具有潜在的治疗意义，但是迄今为止，尚未开发出或提议专门中和siglec-9的候选治疗剂用于治疗用途。据报道，由肿瘤相关的唾液酸配体接合髓单核细胞系的细胞上的siglec-9会抑制nk细胞以及嗜中性粒细胞的免疫监视和肿瘤细胞杀伤作用，所述嗜中性粒细胞是识别并直接杀死微生物的专门粒细胞(laubli等人(2014)《美国国家科学院院报(proc.nat.acad.sci.usa)》111(39):14211-14216)。carlin等人((2009)《血液(blood)》113:3333-3336)报道了宿主唾液酸化聚糖的模拟允许细菌病原体以接合嗜中性粒细胞的siglec-9并且抑制先天性免疫应答。carlin等人描述了抗siglec-9抗体191240(r&dsystems,inc.)与siglec-9上的唾液酸结合位点结合并且抑制与唾液酸的相互作用。carlin等人进一步报道，与非阻断性抗体(克隆e10-286，bd生物科学有限公司)不同，克隆191240增强了嗜中性粒细胞对细菌细胞的活化。类似地，laubli等人(2014)，如上文所述，报道了与克隆e10-286不能增强嗜中性粒细胞对肿瘤细胞的杀伤相比，抗siglec-9抗体克隆191240能够增强嗜中性粒细胞对肿瘤细胞的杀伤。抗siglec-7抗体已经描述于欧洲专利1238282b1(moretta等人)和vitale等人((1999)《美国国家科学院院报(proc.nat.acad.sci.96(26):15091-96)，是指鼠抗siglec-7抗体qa79，以及falco等人(1999)《实验医学期刊(j.exp.med.)》190:793-801报道了抗siglec-7抗体z176。hudak等人(2014)《自然化学生物学(nat.chem.biol.)》10:69-77报道了阻断性抗siglec-7抗体抑制了对肿瘤靶细胞免于nk细胞裂解的siglec-7介导的保护。然而，当转向siglec-9时，抗siglec-9抗体(使用克隆191240)不能抑制对肿瘤靶细胞免于从人类供体中纯化的nk细胞裂解的siglec-9介导的保护(参见，hudak等人(2014))，尽管具有增强嗜中性粒细胞杀死肿瘤细胞的能力(参见，laubli等人(2014)。laubli等人(2014)中报道为非阻断性并且不增强嗜中性粒细胞对肿瘤细胞的杀伤的二价结合抗体克隆e10-286也未能抑制对肿瘤靶细胞免于原代nk细胞裂解的siglec-9介导的保护(jandus等人(2014)《临床研究期刊(j.clin.invest.)》124(4):1810-18020)。尽管对siglec-7和-9感兴趣，但是尚未开发出靶向这些受体的治疗剂。因此，需要靶向这些受体的试剂，以用于治疗疾病，如癌症。技术实现要素：一方面，本公开提供了与嗜中性粒细胞和/或其它细胞相比，充当人siglecs的有效中和剂，特别是在人个体中的nk细胞上的高亲和力结合剂抗体，所述nk细胞表达较低水平的细胞表面siglec，并且在效应淋巴细胞中充当抑制性细胞表面受体(siglec-7、siglec-9)。在一个实施例中，本公开提供了siglec抑制剂(例如，在细胞表面表达的siglec-9)，包含siglec-9的竞争性和非竞争性抑制剂。相应的抑制剂在中和siglec的抑制活性方面具有特别高的效力，无论是否基本上阻断siglec与其唾液酸配体之间的相互作用。在一个实施例中，siglec抑制剂是包括特异性结合人siglec-9蛋白的免疫球蛋白抗原结合结构域的蛋白，例如抗体或抗体片段，或包括此类蛋白的蛋白。在一个实施例中，siglec抑制剂特异性结合人siglec-9蛋白，而不结合人siglec-7和/或表1的其它人siglec(由mabsa、-b、-c、-d、-e和-f例证)。在一个实施例中，siglec抑制剂特异性结合人siglec-9蛋白和人siglec-7蛋白，任选地进一步不结合表1的其它人siglec(由mabs4、-5、-6例证)。在一个实施例中，siglec抑制剂是特异性结合人siglec-9蛋白、人siglec-7蛋白和人siglec-12蛋白的抗体或抗体片段，任选地进一步不结合表1的其它人siglec(由mabs1、-2和-3例证)。在一个实施例中，siglec抑制剂是能够二价结合人siglec-9蛋白的抗体或抗体片段(抑制剂包括两个抗原结合结构域，所述每个抗原结合结构域都能够结合人siglec-9蛋白)。在一个实施例中，本公开提供了一种分离的抗体，其特异性结合人siglec-9多肽，并且中和siglec-9多肽的抑制活性，任选地其中抗体基本上不阻断siglec-9多肽与其唾液酸配体之间的相互作用(由mabs1、2和3例证，参见实例10)，任选地其中抗体阻断siglec-9多肽与其唾液酸配体之间的相互作用(由mabsa、b和c例证，参见实例10)。任选地，siglec-9多肽在细胞，例如，效应淋巴细胞，nk细胞，例如，原代nk细胞，来自人个体的cd56暗淡nk细胞的表面表达。在一个实施例中，抗体进一步结合人siglec-7多肽，并且中和siglec-7多肽的抑制活性，任选地进一步，其中抗体基本上不阻断siglec-7多肽与其唾液酸配体之间的相互作用。在另一个实施例中，抗体不结合人siglec-7多肽。一方面，本发明尤其源自对特异性结合人siglec-9并且增强nk细胞(例如原代nk细胞)对带有唾液酸配体的靶细胞的活性(例如细胞毒性)的抗体的发现。与仅可以在嗜中性粒细胞、siglec转染子和/或在其细胞表面表达或被制备成表达高水平的siglec-9的其它细胞中增强细胞毒性的现有抗体不同，本文所述的抗体即使在表达低水平的siglec-9的细胞，如人类的nk细胞(例如cd56暗淡nk细胞)中也具有功能性。增强此类siglec-9低表达性nk细胞的细胞毒性的能力具有能够额外动员此细胞群体抵抗疾病靶细胞，例如肿瘤细胞、病毒感染的细胞和/或细菌细胞的优势。在一个实施例中，提供了一种抗体或抗体片段(或包括此类片段的蛋白)，其特异性结合人siglec-9，并且在标准4小时体外细胞毒性测定中增强和/或恢复nk细胞(原代nk细胞)的细胞毒性，在所述细胞毒性测定中将表达siglec-9的nk细胞与表达siglec-9的唾液酸配体的靶细胞一起温育。在一个实施例中，在添加nk细胞之前，用51cr标记靶细胞，并且然后将杀伤(细胞毒性)估计为与51cr从细胞向培养基的释放成比例。任选地，可以根据本文实例中的方法进行测定，参见例如实例8。在一个实施例中，抗体或抗体片段能够将表达siglec-9的nk细胞的细胞毒性恢复到至少通过不表达siglec-9的nk细胞观察到的水平(例如，如根据本文实例的方法确定的)。在本文的任何方面，nk细胞(例如原代nk细胞)可以被指定为从供体纯化的新鲜nk细胞，任选地在使用之前在37℃下温育过夜。在本文的任何方面，nk细胞或原代nk细胞可以被指定为siglec-9表达，例如，用于细胞可以在siglec-9上通过流式细胞术进行门控的测定中。参见，例如如本文实例8所描述的nk细胞。在另一个实施例中，提供了一种抗体或抗体片段(或包括此类片段的蛋白)，其特异性结合人siglec-9，并且中和单核细胞来源的树突细胞(modc)中的siglec-9多肽的抑制活性。在一个实施例中，modc在其表面带有siglec-9的唾液酸配体。在一个实施例中，modc在其表面带有siglec-9多肽，所述多肽与唾液酸以顺式相互作用方式进行接合。在一个实施例中，抗体增加modc中的活化或信号传导。在一个实施例中，抗体中和带有siglec-9的唾液酸配体的modc中siglec-9多肽的抑制活性，其中modc是用神经氨酸酶处理modc以除去唾液酸配体降低ec50，以使抗体与modc结合的细胞。在另一个方面，本发明尤其源自发现以可比较的亲和力结合siglec-7和siglec-9多肽两者的抗siglec抗体。此类抗体具有有利的药理特性。如本文所示，nk细胞可以表达抑制性siglec-7和抑制性siglec-9蛋白两者，但是siglec-7和siglec-9跨不同细胞群体也可以具有不同的表达谱。更进一步，已经表明肿瘤细胞可以表达siglec-7和siglec-9的天然配体(聚糖)。因此，抑制一种siglec但是不抑制另一种的治疗剂在中和nk和/或其它免疫细胞群的活性的siglec介导的限制方面可能不是最大有效的。因此抑制siglec7和9两者可能是有利的。然而，siglec-9与人siglec-7的n末端v集ig结构域共有仅约77％的总氨基酸序列同一性。而且，这两个siglec显示出不同的唾液酸结合特异性，表明在由唾液酸配体结合的区域中的结构差异。一方面，本公开提供了高亲和力结合剂抗体，其中和siglec-7和/或siglec-9的抑制活性，并且能够以可比较的亲和力特异性结合抑制性人siglec-7多肽和人siglec-9多肽。例如，在某些实施例中，以可比较的亲和力结合siglec-7和siglec-9的抗体可以具有增强的能力，以阻断siglec中的每一个与其一个或多个唾液酸配体之间的相互作用(由mabs4、5和6例证，参见实例6)。在其它实施例中，结合siglec-9的抗体可以表征为中和siglec-9的抑制活性，而基本上不阻断siglec-9与其一种或多种唾液酸配体，特别是包括neu5aca2-3galb1-4glcnacb结构的唾液酸之间的相互作用(由mabs1、2和3例证，参见实例9)。如本文所示，人siglec-9结合sia1(neu5aca2-3galb1-4glcnacb)和sia2(6'-唾液乳糖)两者，而siglec-7仅结合sia2。一方面，提供了能够阻断此类一个或多个siglec多肽，siglec-9和siglec-7两者的唾液酸配体的相互作用的抗体，例如sia2唾液酸。在一个实施例中，唾液酸是唾液酸化的三糖。在一个实施例中，唾液酸包括6'-唾液酸乳糖结构。另一个方面，提供了结合人siglec-9多肽并且中和其抑制活性的抗体，其中抗体能够阻断sia1(neu5aca2-3galb1-4glcnacb)和sia2(6'-唾液乳糖)两者与siglec-9多肽的相互作用(由mabs1、2和3例证，参见实例10)。在一个实施例中，能够结合siglec-7和siglec-9的抗体用于结合人siglec-7多肽的ec50与其用于结合人siglec-9多肽的ec50相差小于1个对数，如通过流式细胞术确定的用于结合在其表面表达siglec-7或siglec-9的细胞(例如，用相应的siglec中的一个转染但是不表达另一个siglec的cho细胞)。在一个实施例中，抗体用于结合人siglec-7多肽和人siglec-9多肽的ec50相差不超过0.5个对数，0.3个对数，0.2个对数或0.1个对数，如通过流式细胞术确定的用于结合在其表面表达siglec-7或siglec-9的细胞。在其表面表达siglec-7或siglec-9的细胞可以表征为以可比较的表达水平表达各自的siglec。在一个实施例中，抗体进一步以与人siglec-7和/或-9可比较的亲和力结合非人灵长类动物siglec。在一个实施例中，抗体用于结合人siglec-7多肽、人siglec-9多肽和非人灵长类动物siglec的ec50相差不超过1个对数，0.5个对数，0.3个对数，0.2个对数或0.1个对数，如通过流式细胞术确定的用于结合在其表面表达siglec-7或siglec-9的细胞(例如，用相应的siglec转染的cho细胞)。在一个实施例中，提供了一种中和人siglec-9的活性并且具有以下ec50的抗体，所述抗体用于结合人siglec-9多肽和非人灵长类动物siglec的ec50相差不超过1个对数，0.5个对数，0.3个对数，0.2个对数或0.1个对数，如通过流式细胞术确定的用于结合在其表面表达siglec-9的细胞(例如，用siglec转染的cho细胞)。在一个实施例中，抗体用于结合人siglec-7多肽和人siglec-9多肽(以及任选地进一步非人灵长类动物siglec)的结合亲和力的kd相差不超过10倍、5倍、3倍或2倍，如通过例如表面等离子体共振(spr)筛选(如通过用biacoretmspr分析装置分析)确定的)。在一个实施例中，抗体的kd不超过1×10-7m，用于结合到人类人siglec-9多肽(和任选地另外的人siglec-7多肽和/或非人灵长类动物siglec)。在一个实施例中，抗体的kd为约1×10-7m到约1×10-10m，或约1×10-8m到约1×10-10m，用于结合到人类人siglec-9多肽(和任选地另外的人siglec-7多肽和/或非人灵长类动物siglec)。在一个实施例中，抗siglec-9抗体的kd为约1×10-7m到约1×10-10m、约1×10-8m到约1×10-10m、或约1×10-9m到约1×10-11m，用于结合(例如，单价亲和力)到人类人siglec-9多肽，其中抗体与人siglec-7多肽不具有实质结合。在本文的任何实施例中，当将抗体测试为fab'片段时，评估抗体的单价结合亲和力。在一个实施例中，抗体更进一步基本上不结合人siglec-3、-5、-6、-8、-10、-11和-12中的任一个。在一个实施例中，抗体更进一步基本上不结合siglec-14和-16中的任一个。在一个实施例中，抗体更进一步基本上不结合人siglec-6。在一个实施例中，抗体更进一步基本上不结合人siglec-12。在本文实施例的任一个中，抗siglec抗体的特征可以在于结合在细胞的表面上表达的多肽(例如nk细胞、制备成表达siglec-7和/或siglec-9的细胞，例如制备成在其表面表达siglec-7和/或siglec-9的重组cho宿主细胞，如实例中所示)，并且任选地进一步其中抗体以高亲和力结合，如通过流式细胞术确定的。例如，如通过流式细胞术确定的抗体的特征可以在于ec50不超过5μg/ml，任选地不超过1μg/ml，不超过0.5μg/ml，不超过0.2μg/ml或不超过0.1μg/ml，用于结合原代nk细胞(例如，从来自人个体或供体的生物样品中纯化的nk细胞)，任选地结合cd56暗淡nk细胞。可以例如根据实例9的方法确定ec50，例如，经过测试的4个或更多个健康的人类供体，在bdfacscantoii上采集的染色并且使用flowjo软件进行分析，以及使用4参数逻辑拟合计算ec50。另一个方面，本公开提供了一种抗体或抗体片段(例如，抗原结合结构域或包括此类的蛋白质)，其特异性结合人siglec-7和/或-9多肽，并且能够中和此类一个或多个siglec在免疫细胞中的抑制活性，并且能够阻断此类一个或多个siglec多肽与其唾液酸配体的相互作用。在一个实施例中，唾液酸是唾液酸化的三糖。在一个实施例中，唾液酸包括neu5aca2-3galb1-4glcnacb结构。在一个实施例中，唾液酸包括6'-唾液酸乳糖结构。在一个实施例中，抗体或抗体片段特异性结合人siglec-7和/或-9多肽，并且能够中和人nk细胞(例如人原代nk细胞；cd56暗淡nk细胞)、单核细胞、人树突细胞、人巨噬细胞(特别是免疫抑制或m2巨噬细胞)、cd8t细胞和/或人嗜中性粒细胞中的此类一个或多个siglec的抑制活性。在一个实施例中，抗体或抗体片段特异性结合人siglec-7和/或-9多肽，并且能够中和来自人类供体的免疫抑制巨噬细胞(例如m2巨噬细胞)中的此类一个或多个siglec的抑制活性，其中抗体或抗体片段降低了巨噬细胞的免疫抑制活性或能力。如所讨论的，人siglec-9结合sia1(neu5aca2-3galb1-4glcnacb)和sia2(6'-唾液乳糖)两者，而siglec-7仅结合sia2。在某些方面，提供了能够阻断一个或多个siglec-9多肽与是siglec-9而不是siglec-7的配体的唾液酸的相互作用的抗体，例如sia1唾液酸。在一个实施例中，唾液酸是唾液酸化的三糖。在一个实施例中，唾液酸包括neu5aca2-3galb1-4glcnacb结构。在一个实施例中，抗体基本上不阻断一个或多个siglec-7多肽与是siglec-7而不是siglec-9的配体的唾液酸的相互作用，例如含6'-唾液乳糖的唾液酸。还提供了此类抗体的片段和衍生物。在一个实施例中，抗体包括能够结合人siglec-7多肽和/或人siglec-9多肽的抗原结合结构域(例如，单个抗原结合结构域、由重链可变结构域和轻链可变结构域组成的结构域等)。在一个实施例中，抗原结合结构域结合人siglec-9多肽，并且不结合人siglec-7多肽(由mabsa、-b、-c、-d、-e和-f例证)。在一个实施例中，抗原结合结构域结合人siglec-9多肽和人siglec-7多肽两者(由mabs1、-2、-3、-4、-5和-6例证)。在一个实施例中，提供了编码此类抗原结合结构域的蛋白质(例如抗体、多聚体和/或多特异性蛋白质)或核酸。在一个实施例中，本公开的中和性抗siglec抗体减轻了由siglec-7和/或-9在免疫细胞中发挥的抑制活性，增强了淋巴细胞有效识别和/或消除表达siglec-7的唾液酸配体和/或siglec-9的唾液酸配体的癌细胞的能力。抗体(或抗体片段)由于一种或其它类型的配体的表达而降低了癌细胞逃避裂解的能力，并且因此它们增强了免疫系统对肿瘤的监视。在nk隔室中，siglec-9主要表达于cd56暗淡nk细胞上，而siglec-7表达于cd56暗淡和cd56明亮nk细胞上。cd56暗淡nk细胞(cd56暗淡cd16 kir )约占外周血和脾nk细胞的90％，表达穿孔素和颗粒酶，并且是主要的细胞毒性亚群，而cd56明亮nk细胞(cd56明亮cd16暗淡/–kir–)构成淋巴结和扁桃体中大部分nk细胞，并且在活化后主要对细胞因子产生产生反应。在一个实施例中，提供了一种抗体或抗体片段，其特异性结合人siglec-9，并且减轻由siglec-9在人nk细胞(例如，人原代nk细胞；cd56暗淡nk细胞)中发挥的抑制活性，增强nk细胞有效识别和/或消除表达siglec-9的唾液酸配体的癌细胞的能力。在一个实施例中，提供了一种抗体或抗体片段，其特异性结合人siglec-7和siglec-9，并且减轻由siglec-7和siglec-9在人nk细胞(例如，人原代nk细胞；cd56暗淡nk细胞)中发挥的抑制活性，增强nk细胞有效识别和/或消除表达siglec-7和siglec-9的唾液酸配体的癌细胞的能力。在一个实施例中，本公开的抗体可以结合siglec-7和siglec-9两者，并且可以中和siglec-7和siglec-9两者介导的对淋巴细胞(例如，nk细胞、cd8 t细胞)细胞毒性的抑制。一方面，抗体在靶细胞(例如，表达siglec-7的配体和/或siglec-9的配体的细胞、肿瘤细胞)的存在下增加淋巴细胞活化。在一个实施例中，抗体增加nk细胞的细胞毒性，如在标准体外细胞毒性测定中评估的，在所述细胞毒性测定中将表达siglec-9的nk细胞从人类供体纯化，并且与表达siglec-9的唾液酸配体的靶细胞一起温育。在一个实施例中，通过细胞毒性/细胞毒性潜能的标志物，例如cd107和/或cd137表达(动员)的增加来评估细胞毒性抑制的增加的活化或中和。在一个实施例中，通过51cr释放测定中51cr释放的增加来评估细胞毒性抑制的增加的活化或中和。siglec-7可以包括seqidno:1的氨基酸序列。siglec-9可以包括seqidno:2的氨基酸序列。在另一个实施例中，siglec-9包括seqidno:160的氨基酸序列。在一个实施例中，本公开的抗体能够结合包括seqidno:2的氨基酸序列的siglec-9多肽(在位置100处带有赖氨酸，代表约49％的群体)和包括seqidno:160的氨基酸序列的siglec-9多肽两者(在对应于seqidno:2的残基100的位置处带有谷氨酸)，代表约36％的群体)。在任何实施例中，本公开的抗体或抗体片段可以被指定为能够中和表达(或其细胞表达)包括seqidno:2的氨基酸序列的siglec-9多肽的个体中以及表达(或其细胞表达)包括seqidno:160的氨基酸序列的siglec-9多肽的个体中siglec-9的抑制活性。在一个实施例中，提供了一种抗体或抗体片段(或包括此类片段的蛋白质)，其结合人siglec-9多肽，并且能够中和包括seqidno:2的氨基酸序列的siglec-9多肽和包括seqidno:160的氨基酸序列的siglec-9多肽两者的抑制活性。在一个实施例中，提供了一种抗体或抗体片段(或包括此类片段的蛋白质)，其结合人siglec-9多肽，并且能够中和表达包括seqidno:2的氨基酸序列的siglec-9多肽的nk细胞中和表达包括seqidno:160的氨基酸序列的siglec-9多肽的nk细胞中siglec-9多肽的抑制活性。在一个实施例中，抗体增加nk细胞的细胞毒性，如在标准体外细胞毒性测定中评估的，在所述细胞毒性测定中将表达特定siglec-9的nk细胞从人类供体纯化，并且与表达siglec-9的唾液酸配体的靶细胞一起温育。在本文实施例的任一个的一方面，抗体是四聚体(例如，全长、f(ab)'2片段)抗体或抗体片段，其以二价方式结合存在于siglec的细胞外结构域上的表位。例如，以二价方式结合siglec的抗体或抗体片段可以包括两个抗原结合结构域，每个抗原结合结构域能够结合siglec-9多肽，或者每个抗原结合结构域能够结合存在于siglec-7和siglec-9多肽两者上的表位。在本文实施例的任一个的另一个方面，抗体以单价方式结合到siglec，并且在每个siglec，例如siglec-7和/或siglec-9处缺乏激动剂活性。在一个实施例中，以单价方式结合siglec的抗体是fab片段。在本文实施例的任一个中，以单价或二价方式结合到siglec的抗体在siglec9处不含激动剂活性。对于治疗用途，抗体优选地是非消耗性抗体。任选地，抗体包括能够由人新生儿fc受体(fcrn)结合，但是基本上缺乏通过其fc结构域与人fcγr的结合的fc结构域，(例如，cd16'，任选地人cd16a、cd16b、cd32a、cd32b和/或cd64多肽中的一个或多个或每一个)。任选地，抗体包括igg4同种型的人igg1、igg2、igg3的fc结构域，所述结构域包括降低抗体对人cd16a、cd16b、cd32a、cd32b和/或cd64多肽中的一个或多个或每一个的结合亲和力的氨基酸修饰(例如，一个或多个取代)。在一个实施例中，抗体包括一个或多个(例如，两个)结合siglec-9，任选地进一步结合siglec-7的抗原结合结构域。在一个特定实施例中，抗体是四聚体，任选地全长抗体，其包括两个相同的抗原结合结构域(任选地，两个重链和轻链可变区对)，并且结合并中和siglec-9，任选地进一步siglec-7的抑制活性，包括能够由人类新生儿fc受体(fcrn)结合的fc结构域，并且基本上缺乏与人fcγr的结合(例如，cd16；任选地人cd16a、cd16b、cd32a、cd32b和/或cd64多肽中的一个或多个或每一个)。在本文实施例的任一个中，在与人类淋巴细胞上的siglec结合后，单克隆抗体具有增强或重构在靶细胞表面上带有siglec的唾液酸配体的靶人细胞的裂解的能力，和/或当所述靶细胞与所述淋巴细胞，例如效应淋巴细胞，来自人个体的nk或cd8 t细胞，例如cd56暗淡nk细胞接触时，具有增强淋巴细胞活化的能力(例如，如通过淋巴细胞上cd107和/或cd137表达中的增加所确定的)。在一个实施例中，提供了一种抗体，其中和由淋巴细胞的第一亚群表达的第一siglec(例如，cd56暗淡nk细胞上表达的siglec-9)，以及中和由淋巴细胞的第二亚群表达的第二siglec(cd56明亮nk细胞上表达的siglec-7)。人类淋巴细胞的第一和第二亚群(例如，nk细胞、cd8 t细胞、单核细胞、树突细胞、巨噬细胞、免疫抑制或m2巨噬细胞)的特征可以在于例如不同的细胞表面标志物或不同的功能特性或裂解或识别不同的靶细胞的能力(例如被不同的靶细胞活化)。在一个实施例中，抗体减少(阻断)siglec与其唾液酸配体(例如，存在于肿瘤细胞上的配体)的结合。在本文实施例的任一个中，siglec的唾液酸或唾液酸配体是天然配体，例如，已知唾液酸配体(包括唾液酸的配体)与抗体结合的siglec多肽结合。唾液酸是九个碳的酸性单糖家族，通常被发现是n-聚糖、o-聚糖和糖脂的末端分支。siglec被认为识别唾液酸分子的许多方面，像来自位置2的唾液酸键、唾液酸的布置和它们的呈现方式。在本文实施例的任一个中，siglec的配体包括主要5-n-乙酰神经氨酸(neu5ac)衍生物，并且可以包括其它的唾液酸衍生物，像5-n-羟乙酰神经氨酸(neu5gc)衍生物。在一个实施例中，siglec-9和/或siglec-7的配体是存在于糖蛋白(例如，粘蛋白)或糖脂上的唾液酸。在一个实施例中，siglec-7的配体包括存在于b系列神经节苷脂上的α2,8-连接的二唾液酸，例如gd2、gd3和gt1b。在一个实施例中，siglec-7的配体包括内部分支的α2,6-连接的二唾液酸神经节苷脂，例如，dsgb5。在一个实施例中，siglec-9的配体是存在于或包括粘蛋白，例如muc1上的配体。在一个实施例中，siglec-9的配体是含有唾液酸和硫酸盐两者的唾液酸聚糖配体。一方面，抗体结合存在于第一和第二人cd33相关的siglec的细胞外结构域上的共同决定簇。在本文任何实施例的一方面，抗体结合存在于siglec-9上，但是不存在于siglec-7上的决定簇。在本文任何实施例的一方面，抗体结合存在于siglec-7上和siglec-9上的共同决定簇。任选地，由抗体结合的决定簇不存在于一个或多个其它siglec上，例如，siglec-3、-5、-6、-8、-10、-11和-12中的一个或多个(或全部)。在本文实施例的任一个中，抗体结合siglec的细胞外结构域。在本文的某些实施例中，特别是在抗体阻断siglec与其唾液酸配体之间的相互作用的情况下，抗体可以至少部分地在siglec的唾液酸结合结构域内或附近结合。在本文的其它实施例中，特别是在抗体不阻断siglec与其唾液酸配体之间的相互作用的情况下，抗体可以在siglec的唾液酸结合结构域外部结合。在本文实施例的任一个中，在结合到人淋巴细胞(例如原代nk细胞)上的siglec后，当靶细胞与所述淋巴细胞接触时，单克隆抗体具有使带有所述靶细胞表面上的siglec的唾液酸配体的靶人类细胞的裂解重构的能力。在本文实施例的任一个中，抗体的kd(例如，用于单价结合，如根据这里的实例中公开的方法确定的)小于10-8m，优选地小于10-9m，用于结合到siglec多肽(例如，人siglec-7和/或人siglec-9)。只要siglec-7和-9结合位点被认为通常由于与大量表达低亲和力的唾液酸的顺式相互作用而掩蔽在细胞表面，则反式相互作用可以与表达比与顺式竞争的配体更高的亲和力的抗体一起发生。在一个实施例中，中和性抗siglec抗体能够置换唾液酸配体与siglec(例如，siglec-7和/或siglec-9)的结合。本发明还提供了单独或以任何合适的组合具有前述性质中的任一种的人或人源化抗体或抗体片段或其衍生物。一方面，提供了单克隆抗体，其竞争结合由maba、-b、-c、-d、-e和/或-f结合的siglec-9上的表位(例如，其与具有重链和轻链cdr或maba、-b、-c、-d、-e和/或-f中任一个的可变区的抗体竞争结合siglec-9多肽上的表位)。一方面，提供了单克隆抗体，其竞争结合由mabs1、-2、-3、-4、-5和/或-6结合的siglec-7和/或siglec-9上的表位(例如，其与具有重链和轻链cdr或mabs1、-2、-3、-4、-5或-6中任一个的可变区的抗体竞争结合siglec-7和/或siglec-9多肽上的表位)。一方面，提供了一种抗siglec抗体(例如本文的抗siglec抗体中的任一个)，其特征在于减少了与在残基n82、p83、a84、r85、a86和/或v87处具有突变的siglec-7多肽的结合(例如，如表3中列出的突变m9)。一方面，抗siglec-7抗体已经减少了与在残基n81、d100、h102和/或t103处具有突变的siglec-7多肽的结合(例如，如表3中列出的突变)。一方面，抗siglec-7抗体已经减少了与在残基w88、e89、e90、r92处具有突变的siglec-7多肽的结合(例如，如表3中列出的突变m11)。突变的残基位置参考seqidno:1的siglec-7多肽。任选地，抗体不失去对表3的一种或多种其它突变体siglec-7多肽的结合，例如突变体m6、m8、m15或m16中的一种或多种(或所有)。一方面，提供了一种抗siglec抗体(例如本文的抗siglec抗体中的任一个)，其特征在于减少了与在残基n78、p79、a80、r81、a82和/或v83处具有突变的siglec-9多肽的结合(例如，如表3中列出的突变m9)。一方面，抗siglec-9抗体已经减少了与在残基n77、d96、h98和/或t99处具有突变的siglec-9多肽的结合(例如，如表3中列出的突变m10)。一方面，抗siglec-9抗体已经减少了与在残基w84、e85、e86和/或r88处具有突变的siglec-9多肽的结合(例如，如表3中列出的突变m11)。突变的残基位置参考seqidno:2的siglec-9多肽。任选地，抗体不失去对表3的一种或多种其它突变体siglec-9多肽的结合，例如突变体m6、m8、m15或m16中的一种或多种(或所有)。一方面，抗siglec-9抗体已经减少了与具有m9的突变的siglec-9多肽、与具有m10的突变的siglec-9多肽和与具有m11的突变的siglec-9多肽的结合；任选地，抗siglec-9抗体进一步已经减少了与具有m7或m8的突变的siglec-9多肽的结合，其中突变m9、m10、m11、m7和m8列于表3中)。一方面，提供了一种抗siglec抗体(例如本文的抗siglec抗体中的任一个)，其特征在于减少了与在残基s47、h48、g49、w50、i51、y52、p53和/或g54处具有突变的siglec-9多肽的结合(例如，如表3中列出的m6的突变)。突变的残基位置参考seqidno:2的siglec-9多肽。任选地，抗体不失去对表3的一种或多种其它突变体siglec-9多肽的结合，例如突变体9、10和/或11，或突变体m7或m8中的一种或多种(或所有)。一方面，提供了一种抗siglec抗体(例如本文的抗siglec抗体中的任一个)，其特征在于减少了与在残基p55、h58、e122、g124、s125和/或k127处具有突变的siglec-9多肽的结合(例如，如表3中列出的7的突变)。突变的残基位置参考seqidno:2的siglec-9多肽。任选地，抗体不失去对表3的一种或多种其它突变体siglec-9多肽的结合，例如突变体9、10和/或11。一方面，提供了一种抗siglec抗体(例如本文的抗siglec抗体中的任一个)，其特征在于减少了与在残基r120、w128和/或n129处具有突变的siglec-9多肽的结合(例如，如表3中列出的m14的突变)。突变的残基位置参考seqidno:2的siglec-9多肽。一方面，提供了一种抗siglec抗体(例如本文的抗siglec抗体中的任一个)，其特征在于减少了与在残基s27、r116、h133和/或134处具有突变的siglec-9多肽的结合(例如，如表3中列出的m15的突变)。突变的残基位置参考seqidno:2的siglec-9多肽。一方面，提供了一种抗siglec抗体(例如本文的抗siglec抗体中的任一个)，其特征在于减少了与在残基k131和/或h132处具有突变的siglec-9多肽的结合(例如，如表3中列出的m16的突变)。突变的残基位置参考seqidno:2的siglec-9多肽。任选地，抗体不失去对表3的一种或多种其它突变体siglec-9多肽的结合，例如突变体m9、m10和/或m11，或突变体m8或m15中的一种或多种(或所有)。一方面，提供了一种抗siglec抗体(例如本文的抗siglec抗体中的任一个)，其特征在于减少了与在残基r63、a66、n67、t68、d69、q70和/或d71处具有突变的siglec-9多肽的结合(例如，如表3中列出的突变m8)。突变的残基位置参考seqidno:2的siglec-9多肽。任选地，抗体进一步已经减少了对表3的一种或多种其它突变体siglec-9多肽的结合，例如突变体m9、m10和/或m11，或突变体m14、m15或m16中的一种或多种(或所有)。一方面，提供了一种抗siglec抗体(例如，本文的抗siglec抗体中的任一个)，其特征在于减少了与具有突变体m6和m7的氨基酸取代的siglec-9多肽的结合(如表3中所列，参考seqidno:2的siglec-9氨基酸序列)。一方面，抗siglec抗体已经减少了与具有突变体m6的氨基酸取代的siglec-9多肽和与具有突变体m7的氨基酸取代的siglec-9多肽的结合(如表3中所列，参考seqidno:2的siglec-9氨基酸序列)。一方面，提供了一种抗siglec抗体(例如，本文的抗siglec抗体中的任一个)，其特征在于减少了与具有突变体m9、m10和m11的氨基酸取代的siglec-9多肽的结合(如表3中所列，参考seqidno:2的siglec-9氨基酸序列)。一方面，抗siglec抗体已经减少了与具有突变体m9的氨基酸取代的siglec-9多肽、与具有突变体m10的氨基酸取代的siglec-9多肽和与具有突变体m11的氨基酸取代的siglec-9多肽的结合(如表3中所列，参考seqidno:2的siglec-9氨基酸序列)。一方面，提供了一种抗siglec抗体(例如，本文的抗siglec抗体中的任一个)，其特征在于减少了与具有突变体m7、m9、m10和m11的氨基酸取代的siglec-9多肽的结合(如表3中所列，参考seqidno:2的siglec-9氨基酸序列)。一方面，抗siglec抗体已经减少了与具有突变体m7的氨基酸取代的siglec-9多肽、与具有突变体m9的氨基酸取代的siglec-9多肽、与具有突变体m10的氨基酸取代的siglec-9多肽和与具有突变体m11的氨基酸取代的siglec-9多肽的结合(如表3中所列，参考seqidno:2的siglec-9氨基酸序列)。一方面，提供了一种抗siglec抗体(例如，本文的抗siglec抗体中的任一个)，其特征在于减少了与具有突变体m8、m9、m10和m11的氨基酸取代的siglec-9多肽的结合(如表3中所列，参考seqidno:2的siglec-9氨基酸序列)。一方面，抗siglec抗体已经减少了与具有突变体m8的氨基酸取代的siglec-9多肽、与具有突变体m9的氨基酸取代的siglec-9多肽、与具有突变体m10的氨基酸取代的siglec-9多肽和与具有突变体m11的氨基酸取代的siglec-9多肽的结合(如表3中所列，参考seqidno:2的siglec-9氨基酸序列)。一方面，提供了一种抗siglec抗体(例如，本文的抗siglec抗体中的任一个)，其特征在于减少了与具有突变体m8和m16的氨基酸取代的siglec-9多肽的结合(如表3中所列，参考seqidno:2的siglec-9氨基酸序列)。一方面，抗siglec抗体已经减少了与具有突变体m8的氨基酸取代的siglec-9多肽和与具有突变体m16的氨基酸取代的siglec-9多肽的结合(如表3中所列，参考seqidno:2的siglec-9氨基酸序列)。一方面，提供了一种抗siglec抗体(例如，本文的抗siglec抗体中的任一个)，其特征在于减少了与具有突变体m8、m15和m16的氨基酸取代的siglec-9多肽的结合(如表3中所列，参考seqidno:2的siglec-9氨基酸序列)。一方面，抗siglec抗体已经减少了与具有突变体m8的氨基酸取代的siglec-9多肽、与具有突变体m15的氨基酸取代的siglec-9多肽和与具有突变体m16的氨基酸取代的siglec-9多肽的结合(如表3中所列，参考seqidno:2的siglec-9氨基酸序列)。一方面，提供了一种抗siglec抗体(例如，本文的抗siglec抗体中的任一个)，其特征在于减少了与具有突变体m8、m14、m15和m16的氨基酸取代的siglec-9多肽的结合(如表3中所列，参考seqidno:2的siglec-9氨基酸序列)。一方面，抗siglec抗体已经减少了与具有突变体m8的氨基酸取代的siglec-9多肽、与具有突变体m14的氨基酸取代的siglec-9多肽、与具有突变体m15的氨基酸取代的siglec-9多肽和与具有突变体m16的氨基酸取代的siglec-9多肽的结合(如表3中所列，参考seqidno:2的siglec-9氨基酸序列)。一方面，提供了一种抗siglec抗体(例如，本文的抗siglec抗体中的任一个)，其特征在于减少了与具有突变体m14和m16的氨基酸取代的siglec-9多肽的结合(如表3中所列，参考seqidno:2的siglec-9氨基酸序列)。一方面，抗siglec抗体已经减少了与具有突变体m14的氨基酸取代的siglec-9多肽和与具有突变体m16的氨基酸取代的siglec-9多肽的结合(如表3中所列，参考seqidno:2的siglec-9氨基酸序列)。在本文的任何实施例中，当在与siglec的结合是单价的构型中测试抗体时，可以指定与具有氨基酸取代的siglec-9多肽的结合是评估的，任选地其中抗体作为fab'片段测试，例如，包括抗体的vh和vl的fab'片段，包括vh和vl的fab'片段，其中vh和vl包括抗体的相应vh和vlcdr1、2和3。在一个实施例中，提供了抗原结合化合物，其包括选自由以下组成的组的抗体的重链和轻链cdr1、2和3，或结合相同的表位和/或与选自由以下组成的组的抗体竞争结合siglec-7和/或siglec-9多肽：(a)单克隆抗体，其包括(i)重链和(ii)轻链，所述重链包括seqidno:3的重链可变区的cdr1、2和3，所述轻链包括seqidno:4的轻链可变区的cdr1、2和3；(b)单克隆抗体，其包括(i)重链和(ii)轻链，所述重链包括seqidno:5的重链可变区的cdr1、2和3，所述轻链包括seqidno:6的轻链可变区的cdr1、2和3；(c)单克隆抗体，其包括(i)重链和(ii)轻链，所述重链包括seqidno:7的重链可变区的cdr1、2和3，所述轻链包括seqidno:8的轻链可变区的cdr1、2和3；(d)单克隆抗体，其包括(i)重链和(ii)轻链，所述重链包括seqidno:9的重链可变区的cdr1、2和3，所述轻链包括seqidno:10的轻链可变区的cdr1、2和3；(e)单克隆抗体，其包括(i)重链和(ii)轻链，所述重链包括seqidno:11的重链可变区的cdr1、2和3，所述轻链包括seqidno:12的轻链可变区的cdr1、2和3；以及(f)单克隆抗体，其包括(i)重链和(ii)轻链，所述重链包括seqidno:13的重链可变区的cdr1、2和3，所述轻链包括seqidno:14的轻链可变区的cdr1、2和3。(g)单克隆抗体，其包括(i)重链和(ii)轻链，所述重链包括seqidno:15的重链可变区的cdr1、2和3，所述轻链包括seqidno:16的轻链可变区的cdr1、2和3；(h)单克隆抗体，其包括(i)重链和(ii)轻链，所述重链包括seqidno:17的重链可变区的cdr1、2和3，所述轻链包括seqidno:18的轻链可变区的cdr1、2和3；(i)单克隆抗体，其包括(i)重链和(ii)轻链，所述重链包括seqidno:19的重链可变区的cdr1、2和3，所述轻链包括seqidno:20的轻链可变区的cdr1、2和3；(j)单克隆抗体，其包括(i)重链和(ii)轻链，所述重链包括seqidno:21的重链可变区的cdr1、2和3，所述轻链包括seqidno:22的轻链可变区的cdr1、2和3；(k)单克隆抗体，其包括(i)重链和(ii)轻链，所述重链包括seqidno:23的重链可变区的cdr1、2和3，所述轻链包括seqidno:24的轻链可变区的cdr1、2和3；以及(l)单克隆抗体，其包括(i)重链和(ii)轻链，所述重链包括seqidno:25的重链可变区的cdr1、2和3，所述轻链包括seqidno:26的轻链可变区的cdr1、2和3。在本发明的实施例中的任一个的一方面，结合siglec-9多肽的抗体可以具有重链和轻链，所述重链具有选自由以下组成的组的抗体的重链的一个、两个或三个cdr：抗体maba、-b、-c、-d、-e和-f；所述轻链具有选自由以下组成的组的相应抗体的轻链的一个、两个或三个cdr：抗体maba、-b、-c、-d、-e和-f。一方面，提供了结合人siglec-9多肽的抗原结合结构域或抗体，其包括：包括氨基酸序列sywmh(seqidno:75)的重链cdr1；包括氨基酸序列einpsnghtnynekfes(seqidno:78)的重链cdr2；包括氨基酸序列gvesydfddaldy(seqidno:80)的重链cdr3；包括氨基酸序列rasqdinnyln(seqidno:83)的轻链cdr1；包括氨基酸序列ytsrlhs(seqidno:57)的轻链cdr2；包括氨基酸序列qqgntlpft(seqidno:86)的轻链cdr3；以及人类重链和轻链框架序列。一方面，提供了结合人siglec-9多肽的抗原结合结构域或抗体，其包括：包括氨基酸序列sywmh(seqidno:75)或sywih(seqidno:198)的重链cdr1；包括氨基酸序列einpsnghtnynekfkt(seqidno:90)或einpsnghtnyaekfkt(seqidno:199)的重链cdr2；包括氨基酸序列gvetydfddamdy(seqidno:92)的重链cdr3；包括氨基酸序列rasqdinnyln(seqidno:83)或qasqdinnyln(seqidno:200)的轻链cdr1；包括氨基酸序列ftsrlhs(seqidno:95)的轻链cdr2；包括氨基酸序列qqgdtfpft(seqidno:96)的轻链cdr3；以及人类重链和轻链框架序列。一方面，提供了结合人siglec-9多肽的抗原结合结构域或抗体，其包括：包括氨基酸序列nyemn(seqidno:98)的重链cdr1；包括氨基酸序列wintytgestyaddfk(seqidno:101)的重链cdr2；包括氨基酸序列ddygrsygfay(seqidno:103)的重链cdr3；包括氨基酸序列rasesvdsygnsfmh(seqidno:106)的轻链cdr1；包括氨基酸序列laskles(seqidno:109)的轻链cdr2；包括氨基酸序列hqnnedppwt(seqidno:110)的轻链cdr3；以及人类重链和轻链框架序列。一方面，提供了结合人siglec-9多肽的抗原结合结构域或抗体，其包括：包括氨基酸序列dysmh(seqidno:112)的重链cdr1；包括氨基酸序列wiitetgeptyaddfrg(seqidno:115)的重链cdr2；包括氨基酸序列dfdgy(seqidno:117)的重链cdr3；包括氨基酸序列raseniysyla(seqidno:119)的轻链cdr1；包括氨基酸序列naktlte(seqidno:122)的轻链cdr2；包括氨基酸序列qhhygfpwt(seqidno:123)的轻链cdr3；以及人类重链和轻链框架序列。一方面，提供了结合人siglec-9多肽的抗原结合结构域或抗体，其包括：包括氨基酸序列tfgmh(seqidno:125)的重链cdr1；包括氨基酸序列yissgsnaiyyadtvkg(seqidno:128)的重链cdr2；包括氨基酸序列pgygawfay(seqidno:130)的重链cdr3；包括氨基酸序列rasssvssaylh(seqidno:133)的轻链cdr1；包括氨基酸序列stsnlas(seqidno:136)的轻链cdr2；包括氨基酸序列qqysaypyt(seqidno:137)的轻链cdr3；以及人类重链和轻链框架序列。一方面，提供了结合人siglec-9多肽的抗原结合结构域或抗体，其包括：包括氨基酸序列dysmh(seqidno:112)的重链cdr1；包括氨基酸序列vistyngntnynqkfkg(seqidno:139)的重链cdr2；包括氨基酸序列rgyygssswfgy(seqidno:141)的重链cdr3；包括氨基酸序列kasqnvgtdva(seqidno:144)的轻链cdr1；包括氨基酸序列sasyrys(seqidno:147)的轻链cdr2；包括氨基酸序列qqynsfpyt(seqidno:148)的轻链cdr3；以及人类重链和轻链框架序列。在本发明的实施例中的任一个的一方面，结合siglec-7和siglec-9多肽的抗体可以具有重链和/或轻链，所述重链和/或轻链具有选自由以下组成的组的抗体的相应重链和/或轻链中的一个、两个或三个cdr：抗体mabs1、-2、-3、-4、-5和-6。一方面，提供了结合人siglec-9多肽的抗原结合结构域或抗体，其包括：(a)重链可变区和(b)轻链可变区，所述重链可变区包括衍生自人ighv1-69(或任选地ighv1-46)基因的人重链框架区(fr1、fr2、和/或fr3)以及maba抗体的重链cdr1、2和3；所述轻链可变区包括衍生自人igkv1-33基因的人轻链框架区(fr1、fr2、和/或fr3)以及maba抗体的轻链cdr1、2和3。任选地，cdr通过kabat编号定义。在一个实施例中，重链可变区包括与seqidno:15或seqidno:170-173中的任一个的氨基酸序列共有至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)同一性的氨基酸序列，和/或轻链可变区包括与seqidno:16、174、175或176的氨基酸序列共有至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)同一性的氨基酸序列。在一个实施例中，重链可变区包括mabah0、h1、h2或h3可变结构域的氨基酸序列(或与其共有至少80、90％、95％或98％同一性的氨基酸序列)，并且轻链可变区包括mabal0、l1或l2可变结构域的氨基酸序列(或与其共有至少80、90％、95％或98％(或100％)同一性的氨基酸序列)。一方面，提供了结合人siglec-9多肽的抗原结合结构域或抗体，其包括：(a)重链可变区和(b)轻链可变区，所述重链可变区包括衍生自人ighv1-69(或任选地ighv1-46)基因的人重链框架区(fr1、fr2、和/或fr3)以及mabb抗体的重链cdr1、2和3；所述轻链可变区包括衍生自人igkv1-33基因的人轻链框架区(fr1、fr2、和/或fr3)以及mabb抗体的轻链cdr1、2和3。任选地，cdr通过kabat编号定义。在一个实施例中，重链可变区包括与seqidno:17、177、178、179、180、181或182的氨基酸序列共有至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)同一性的氨基酸序列，和/或轻链可变区包括与seqidno:18、183、184或185的氨基酸序列共有至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)同一性的氨基酸序列。在一个实施例中，重链可变区包括mabbh0、h1、h2、h3、h4或h5可变结构域的氨基酸序列(或与其共有至少80、90％、95％或98％同一性的氨基酸序列)，并且轻链可变区包括mabbl0、l1或l2可变结构域的氨基酸序列(或与其共有至少80、90％、95％或98％(或100％)同一性的氨基酸序列)。一方面，提供了结合人siglec-9多肽的抗原结合结构域或抗体，其包括：(a)重链可变区和(b)轻链可变区，所述重链可变区包括衍生自人ighv7-4-1基因的人重链框架区(fr1、fr2、和/或fr3)以及mabc抗体的重链cdr1、2和3；所述轻链可变区包括衍生自人igkv7-3基因的人轻链框架区(fr1、fr2、和/或fr3)以及mabc抗体的轻链cdr1、2和3。任选地，cdr通过kabat编号定义。在一个实施例中，重链可变区包括与seqidno:20、192、193、194或195的氨基酸序列共有至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)同一性的氨基酸序列，和/或轻链可变区包括与seqidno:20、196或197的氨基酸序列共有至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)同一性的氨基酸序列。在一个实施例中，重链可变区包括mabbh0、h1、h2或h3可变结构域的氨基酸序列(或与其共有至少80、90％、95％或98％同一性的氨基酸序列)，并且轻链可变区包括mabbl0或l1可变结构域的氨基酸序列(或与其共有至少80、90％、95％或98％(或100％)同一性的氨基酸序列)。一方面，提供了结合人siglec-9多肽的抗原结合结构域或抗体，其包括：(a)重链可变区和(b)轻链可变区，所述重链可变区包括衍生自人ighv7-4-1(例如，7-4-1*02)基因(和任选地衍生自ighj6(例如，ighj6*01)基因的fr4)的人重链框架区(fr1、fr2和fr3)以及mabd抗体的重链cdr1、2和3；所述轻链可变区包括衍生自人igkv1-39(例如，1-39*01)基因的人轻链框架区(fr1、fr2和fr3)以及mabd抗体的轻链cdr1、2和3。任选地，cdr通过kabat编号定义。在一个实施例中，重链可变区包括与seqidno:21、186、187或188中的任一个的氨基酸序列共有至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)同一性的氨基酸序列和/或轻链可变区包括与seqidno:22、189、190或191的氨基酸序列共有至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)同一性的氨基酸序列。在一个实施例中，重链可变区包括mabdh0、h1或h2可变结构域的氨基酸序列(或与其共有至少80％、90％、95％或98％(或100％)同一性的氨基酸序列)，并且轻链可变区包括mabbl0、l1或l2可变结构域的氨基酸序列(或与其共有至少80、90％、95％或98％(或100％)同一性的氨基酸序列)。一方面，提供了一种抗原结合结构域，其结合人siglec-9多肽，并且能够中和由人nk细胞表达的siglec-9多肽的抑制活性，其中抗原结合结构域包括vh和vl，所述vh包括与seqidno:170、171、172和173中分别示出的mabah0、h1、h2或h3可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列，所述vl包括与seqidno:174、175和176中分别示出的mabal0、l1或l2可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列。一方面，提供了一种抗原结合结构域，其结合人siglec-9多肽，并且能够中和由人nk细胞表达的siglec-9多肽的抑制活性，其中抗原结合结构域包括vh和vl，所述vh包括与seqidno:177、178、179、180、181和182中分别示出的mabbh0、h1、h2、h3、h4或h5可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列，所述vl包括与seqidno:183、184和185中分别示出的mabbl0、l1或l2可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列。一方面，提供了一种抗原结合结构域，其结合人siglec-9多肽，并且能够中和由人nk细胞表达的siglec-9多肽的抑制活性，其中抗原结合结构域包括vh和vl，所述vh包括与seqidno:186、187和188中分别示出的mabdh0、h13或h2可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列，所述vl包括与seqidno:189、190和191中分别示出的mabdl0、l1或l2可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列。一方面，提供了一种抗原结合结构域或蛋白，其包括结合人siglec-9多肽的此类(例如抗体、抗体片段、双特异性抗体、单链或多聚蛋白、fc蛋白)，其中抗原结合结构域或抗体包括选自由以下组成的组的vh和vl组合：(a)vh和vl，所述vh包括具有seqidno:15中示出的氨基酸序列的所述vh结构域的cdr1、2和3以及人ighv1-69(或任选地ighv1-46)基因区段的fr1、2和3，所述vl包括具有seqidno:16中示出的氨基酸序列的所述vl结构域的cdr1、2和3以及人igkv1-33基因区段的fr1、2和3；(b)vh和vl，所述vh包括具有seqidno:17中示出的氨基酸序列的所述vh结构域的cdr1、2和3以及人ighv1-69(或任选地ighv1-46)基因区段的fr1、2和3，所述vl包括具有seqidno:18中示出的氨基酸序列的所述vl结构域的cdr1、2和3以及人igkv1-33基因区段的fr1、2和3；(c)vh和vl，所述vh包括具有seqidno:19中示出的氨基酸序列的vh结构域的cdr1、2和3以及人ighv7-4-1基因区段的fr1、2和3，所述vl包括具有seqidno:20中示出的氨基酸序列的vl结构域的cdr1、2和3以及人igkv7-3基因区段的fr1、2和3；以及(d)vh和vl，所述vh包括具有seqidno:21中示出的氨基酸序列的所述vh结构域的cdr1、2和3以及人ighv7-4-1基因区段(任选地与ighj6基因区段组合)的fr1、2和3，所述vl包括具有seqidno:22中示出的氨基酸序列的所述vl结构域的cdr1、2和3以及人igkv1-39基因区段的fr1、2和3。在任何方面，抗体或抗原结合结构域可以包括vh和vl，其中vh和vl各自包括与以下抗体中的任一个的相应vh和vl至少80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列：mabah0l0、mabah0l1、mabah0l2、mabah1l0、mabah1l1、mabah1l2、mabah2l0、mabah2l1、mabah2l2、mabah3l0、mabah3l1或mabah3l2。在任何方面，抗体或抗原结合结构域可以包括vh和vl，其中vh和vl各自包括与以下抗体中的任一个的相应vh和vl至少80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列：mabbh0l0、mabbh0l1、mabbh0l2、mabbh1l0、mabbh1l1、mabbh1l2、mabbh2l0、mabbh2l1、mabbh2l2、mabbh3l0、mabbh3l1、mabbh3l2、mabbh4l0、mabbh4l1、mabbh4l2、mabbh5l0、mabbh5l1或mabbh5l2。在任何方面，抗体或抗原结合结构域可以包括vh和vl，其中vh和vl各自包括与以下抗体中的任一个的相应vh和vl至少80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列：mabch0l0、mabch0l1、mabch1l0、mabch1l1、mabch2l0、mabch2l1、mabch3l0或mabch3l1。在任何方面，抗体或抗原结合结构域可以包括vh和vl，其中vh和vl各自包括与以下抗体中的任一个的相应vh和vl至少80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列：mabdh0l0、mabdh0l1、mabdh0l2、mabdh1l0、mabdh1l1、mabdh1l2、mabdh2l0、mabdh2l1或mabdh2l2。这些抗体的相应vh和vl序列列于表c和实例2部分b中。在一个实施例中，mabavh可以包括在seqidno:15的残基26(kabatfr1)、27(kabatfr1)、74(kabatfr3)和/或98(kabatfr3)处(或根据kabat编号的对应位置处)的氨基酸取代。在一个实施例中，mabavh包括在kabat位置26处的酪氨酸(例如，g26y取代)和/或在位置27处的苯丙氨酸(例如，g27f取代)。在一个实施例中，mabavh包括在kabat位置74处的精氨酸(例如，e74r取代)。在一个实施例中，mabavh包括在kabat位置98处的天冬酰胺(例如，r98n取代)。在一个实施例中，mabavl可以包括在kabat残基44(kabatfr2)和/或71(kabatfr3)处的氨基酸取代。在一个实施例中，mabavl包括在kabat位置44处的异亮氨酸(例如，k44i取代)。在一个实施例中，mabavl包括在kabat位置71处的酪氨酸(例如，d71y取代)。在一个实施例中，mabbvh包括kabat残基26、27、30和/或74的1、2、3或4处的框架中的取代。在一个实施例中，mabbvh包括在kabat残基34、61和/或66的1、2或3处的cdr中的取代(或根据kabat编号的对应位置处)。在一个实施例中，mabbvh包括在kabat位置26处的缬氨酸和/或在位置27处的酪氨酸(kabatfr1)。在一个实施例中，mabbvh包括在kabat位置30处的苏氨酸(kabatfr1)。在一个实施例中，mabbvh包括在kabat位置74处的赖氨酸(kabatfr3)。在一个实施例中，mabbvh包括在kabat位置34处的异亮氨酸(kabatcdr1)(例如，m34i取代)。在一个实施例中，mabbvh包括在kabat位置61处的丙氨酸(kabatcdr2)(例如，n61a取代)。在一个实施例中，mabbvh包括在kabat位置66处的甘氨酸(kabatcdr2)(例如，t66g取代)。在一个实施例中，mabbvl可以包括在kabat残基24(kabatcdr1)和/或71(kabatfr3)处的氨基酸取代。在一个实施例中，mabbvl包括在kabat位置24处的谷氨酰胺(例如，r24q取代)。在一个实施例中，mabbvl包括在kabat位置71处的酪氨酸(例如，f71y取代)。在一个实施例中，mabcvh包括在kabat残基39(kabatfr2)、91(kabatfr3)和/或93(kabatfr3)处的氨基酸取代。在一个实施例中，mabcvh包括在kabat位置39处的谷氨基酸(例如，q39e取代)。在一个实施例中，mabcvh包含在kabat位置91处的苯丙氨酸(例如，y91f取代)。在一个实施例中，mabcvh包括在kabat位置93处的缬氨酸(例如，a93v取代)。在一个实施例中，mabcvl包括在kabat残基68(kabatfr3)处的氨基酸取代。在一个实施例中，mabcvl包括在kabat位置68处的精氨酸(例如，g69r取代)。在一个实施例中，mabdvh包括在kabat残基46(kabatfr2)和/或95(kabatfr3)处的氨基酸取代。在一个实施例中，mabdvh包括在kabat位置46处的赖氨酸(例如，e46k取代)。在一个实施例中，mabdvh包括在kabat位置95处的苯丙氨酸(例如，y95f取代)。在一个实施例中，mabdvl包括在kabat残基46(kabatfr2)和/或63(kabatfr3)处的氨基酸取代。在一个实施例中，mabdvl包括在kabat位置46处的苯丙氨酸(例如，l46f取代)。在一个实施例中，mabdvl包括在kabat位置63处的精氨酸(例如，s63r取代)。在本发明的实施例中的任一个的一方面，与siglec的结合可以被指定为与细胞siglec的结合，其中siglec在细胞的表面处表达，例如天然或经过修饰的细胞siglec、由重组宿主细胞表达的siglec、由nk细胞、cd8t细胞等表达的siglec。在任何实施例中，抗体可以被指定为抗体片段(例如，包括1、2或3个vh和/或vlcdr的抗体片段，包括vh和/或vl结构域的抗体片段，或包括高变区或抗体结合结构域的抗体片段)或包括此类抗体片段的蛋白。本发明还提供了编码具有任何前述特性的人或人源化抗体或抗体片段的核酸、包括此类核酸的载体、包括此类载体的细胞、以及产生人抗siglec抗体的方法，所述方法包括在适于表达抗siglec抗体或抗体片段(或包括此类的蛋白)的条件下培养此类细胞。本发明还涉及组合物，如药学上可接受的组合物和试剂盒，其包括此类蛋白质、核酸、载体和/或细胞，以及通常可以是促进调配、递送、稳定性或组合物的其它特性(例如，各种载剂)的活性成分或非活性成分的一种或多种另外的成分。本发明进一步涉及制备和使用此类抗体、核酸、载体、细胞、生物和/或组合物的各种新的和有用的方法，如在siglec介导的生物活性的调节中，例如在治疗与其相关的疾病，特别是癌症和传染病中。本发明还提供了一种体外方法，用于调节siglec-7和/或siglec-9表达性淋巴细胞，任选地nk细胞和/或cd8 t细胞的活性，所述方法包括使在其表面表达siglec-7和/或siglec-9的淋巴细胞(例如原代nk细胞)与中和siglec-7和siglec-9的抑制活性的抗体接触。本发明还提供了增强和/或调节有需要的受试者中淋巴细胞(例如，nk细胞、cd8 t细胞)活性的活性的方法，例如通过调节cd56暗淡nk细胞(主要的细胞毒性亚群)和任选地另外的cd56明亮nk细胞(淋巴结和扁桃体中的大部分nk细胞，并且在活化后，主要对细胞因子产生产生反应)来增强nk细胞活性的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的前述组合物中的任一种。在一个实施例中，受试者是患有癌症的患者。例如，患者可能患有造血系统癌症，例如急性髓性白血病、慢性髓性白血病、多发性骨髓瘤或非霍奇金氏淋巴瘤。替代性地，患者可能患有实体瘤，例如结肠直肠癌、肾癌、卵巢癌、肺癌、乳腺癌或恶性黑素瘤。在另一个实施例中，受试者是患有传染病的患者。在本文提供的本发明的描述中将更加充分地描述这些方面，并且额外的方面、特征和优点将是显而易见的。附图说明图1示出了抗siglec抗体与nk细胞的结合。siglecmfi：荧光强度的平均值。很大一部分(约44％)nk细胞表达siglec-7和siglec-9两者，表明很大比例的nk细胞可以被这些受体中的每一个(或两者)抑制，作为存在于例如肿瘤细胞上的聚糖配体的函数。图2示出了例如抗体结合siglec-7但是不结合siglec-9或猕猴siglec(右图)，结合siglec-7、siglec-9和猕猴siglec中的每一个(中图)，以及结合siglec-9，但是不结合siglec-7或猕猴siglec(左图)的流式细胞术的代表性结果。图3示出了通过流式细胞术滴定抗体maba、mabc和mabd与modc(左图)和经过神经氨酸酶处理的modc(右图)的结合，以及它们相应的ec50值。在神经氨酸酶处理之后，ec50高度增强(10倍)，表明在神经氨酸酶处理之前，在modc上表达的siglec-9与其唾液酸配体以顺式相互作用方式进行接合。然而，平台期水平未改变，表明抗体可以结合细胞表面上的所有siglec-9(结合和未结合)构象，并且抑制monodc以及其它细胞类型(例如单核细胞和巨噬细胞m1和m2)中的顺式相互作用和信号传导。图4示出了在siglec-7和-9交叉反应抗体中(图4b)和在siglec-9单特异性(非siglec-7结合)抗体中(图4a)ytssiglec-9*细胞毒性的增加的剂量依赖性诱导。图5示出了使用原代nk细胞(如从供体中纯化的新鲜nk细胞)和ht29大肠癌细胞，在经典的51cr释放测定中，由两个不同的人类供体(供体d1(左图)和d2(右图))中的抗体maba、mabc、mabd、mabe和mabf介导的原代nk细胞细胞毒性的增加。图6示出了在一个人类供体中，在ht29肿瘤细胞的存在下，由几种抗siglec-9和抗siglec-7/9抗体maba、mabb、mabf、mab6和mab4介导的表达cd137的siglec-9阳性nk细胞的％的增加。抗siglec-9抗体将siglec-9表达性原代人nk细胞的细胞毒性完全恢复到在同一供体的siglec-9阴性原代人nk细胞中观察到的水平。图7示出了抗体maba和mab1诱导siglec-9阳性cd137 nk细胞(％)增加(中图)，而不诱导siglec-9阴性cd137 nk细胞(％)增加(右图)。左图示出了在不存在抗体的情况下表达cd137的nk的％。图8示出了在存在抗体的情况下，siglec-9-fc蛋白与ramos细胞的结合(上图)。抗siglec/9mabsmaba、mabb、mabc和mabd各自抑制siglec-9-fc蛋白与ramos细胞的结合，而mabe示出部分抑制，并且mabf不抑制结合。下图示出了在抗体的存在下，siglec-9-fc蛋白与k562细胞的结合。抗siglec/9mabsmaba、mabb、mabc和mabd各自抑制siglec-9-fc蛋白与ramos细胞的结合，而mabe和mabf两者示出部分抑制。图9和10示出了使用elisa测定，测试通过抗siglec-7/9抗体，siglec-7和-9与唾液酸化的配体之间的相互作用的阻断。图9示出了mab1、2、4、5和6阻断siglec-7与sia2的相互作用，但是mab3却没有。图10示出所有mab都阻断siglec-9与sia2的相互作用，而mab1、mab2和mab3示出低的抑制siglec-9与sia1的相互作用的能力，并且因此基本上不阻断sia1相互作用。图11-14示出了人siglec-9蛋白。图11a示出了siglec-9n末端v集ig样结构域的结构，其中在siglec-9突变体m9、m10和m11中取代的残基以深色阴影示出；图11b示出了在siglec-9突变体m7、m9、m10和m11中取代的残基；图11c示出了在siglec-9突变体m8、m9、m10和m11中取代的残基。图12示出了siglec-9n末端v集ig样结构域的结构，其中在siglec-9突变体m6和m7中取代的残基以深色阴影示出。图13a示出了siglec-9n末端v集ig样结构域的结构，其中在siglec-9突变体m16中取代的残基以深色阴影示出。图13b示出了在siglec-9突变体m14和m16中取代的残基。图14a示出了在深色阴影中示出的siglec-9突变体m8中取代的残基。图14b示出了在siglec-9突变体m8、m14、m15和m16中取代的残基。在图11-14的每一个中，以浅色阴影示出了唾液酸配体结合位点。具体实施方式定义如说明书中所用，“一”或“一个”可能表示一个或多个。如一个或多个权利要求中所用，当与单词“包括”结合使用时，单词“一”或“一个”可以表示一个或多于一个。如本文所用，“另一个”可以表示至少第二个或更多个。当使用“包括”时，这可以任选地由“基本上由……组成”或“由……组成”替换。人siglec-7(示出在基因库登录号np_055200.1中，其全部公开内容通过引用并入本文)是cd33相关的siglec家族的成员(angata和varki，《糖生物学(glycobiology)》10(4),431-438(2000))。人siglec-7包括467个氨基酸，具有以下氨基酸序列：人siglec-9(示出在基因库登录号np055256.1中，其全部公开内容通过引用并入本文)是cd33相关的siglec家族的成员(angata和varki，《生物化学杂志(j.biol.chem.)》275(29),22127-22135(2000))。人siglec-9包括463个氨基酸，具有以下氨基酸序列：在本发明的上下文中，“中和nk细胞细胞毒性的siglec介导的抑制”、“中和t细胞细胞毒性的siglec介导的抑制”或“中和siglec的抑制活性”是指一个过程，其中siglec(例如，siglec-7、siglec-9)负面影响细胞内过程的能力受到抑制，导致淋巴细胞反应，如细胞因子释放和细胞毒性反应。这可以例如在基于标准nk或t细胞的细胞毒性测定中测量，在所述细胞毒性测定中测量治疗性化合物刺激通过siglec阳性淋巴细胞杀死唾液酸配体阳性细胞的能力。在一个实施例中，抗体制剂使siglec限制的淋巴细胞的细胞毒性增加至少10％，使淋巴细胞细胞毒性增加至少40％或50％，或任选地使nk细胞毒性增加至少70％，并且参考所述的细胞毒性测定。在一个实施例中，抗体制剂通过siglec限制的淋巴细胞使细胞因子释放增加至少10％，任选地使细胞因子释放增加至少40％或50％，或任选地使细胞因子释放增加至少70％，并且参考所述的细胞毒性测定。在一个实施例中，抗体制剂通过siglec限制的淋巴细胞使细胞毒性的标志物(例如，cd107和/或cd137)的细胞表面表达增加至少10％，任选地增加至少40％或50％，或任选地使细胞毒性的标志物(例如，cd107和/或cd137)的细胞表面表达增加至少70％。抗siglec抗体“阻断”siglec分子与唾液酸配体的结合的能力意味着在使用可溶性或细胞表面相关的siglec和唾液酸分子的测定中，抗体可以以剂量依赖性方式可检测地减少siglec分子与唾液酸分子的结合，其中在不存在抗体的情况下，siglec分子可检测地结合唾液酸分子。每当在整个说明书中参考抗siglec结合剂(例如抗体)提及“癌症的治疗”等时，均表示：(a)癌症的治疗方法，所述方法包括以下步骤：向需要此类治疗的个体、哺乳动物，尤其是人施用(对于至少一种治疗而言)抗siglec结合剂(优选地在药学上可接受的载剂材料中)，其剂量允许治疗癌症(治疗有效量)，优选地如本文指定的剂量(量)；(b)抗siglec结合剂在治疗癌症中，或抗-siglec结合剂用于所述治疗中(特别是在人类中)的用途；(c)抗siglec结合剂在制造用于治疗癌症的药物制剂中的用途，使用抗siglec结合剂制造用于治疗癌症的药物制剂的方法，所述方法包括使抗siglec结合剂与药学上可接受的载剂，或包括有效剂量的适用于癌症治疗的抗siglec结合剂的药物制剂混合；或(d)a)、b)和c)的任何组合，根据在提交本申请的国家允许专利申请的主题。如本文所用，术语“抗原结合结构域”是指包括能够免疫特异性结合到表位的三维结构的结构域。因此，在一个实施例中，所述结构域可以包括高变区，任选地抗体链的vh和/或vl结构域，任选地至少vh结构域。在另一个实施例中，结合结构域可以包括抗体链的至少一个互补性决定区(cdr)。在另一个实施例中，结合结构域可以包括来自非免疫球蛋白支架的多肽结构域。如本文可互换使用，术语“抗体”或“免疫球蛋白”包含完整抗体和其任何抗原结合片段或单链。典型的抗体包括通过二硫键互连的至少两条重(h)链和两条轻(l)链。每个重链由重链可变区(vh)和重链恒定区构成。重链恒定区由三个结构域ch1、ch2和ch3构成。每个轻链由轻链可变区(vl)和轻链恒定区构成。轻链恒定区由一个结构域cl构成。示例性免疫球蛋白(抗体)结构单元包括四聚体。每个四聚体由两对相同的多肽链构成，每对具有一个“轻”(约25kda)和一个“重”链(约50-70kda)。每条链的n-末端限定了约100个到110个或更多氨基酸的可变区，其主要负责抗原识别。术语可变轻链(vl)和可变重链(vh)分别指这些轻链和重链。对应于不同类免疫球蛋白的重链恒定结构域分别称为“α”、“δ”、“ε”、“γ”和“μ”。这些中的几个进一步分为亚类或同种型，如igg1、igg2、igg3、igg4等。不同类免疫球蛋白的亚基结构和三维构型是众所周知的。igg是本文使用的示例性抗体类别，因为它们是生理情况中最常见的抗体，并且因为它们最容易在实验室环境中制备。任选地，抗体是单克隆抗体。抗体的具体实例是人源化、嵌合、人或其它人类合适的抗体。“抗体”还包含任何本文所述抗体的任何片段或衍生物。“交叉反应”抗siglec抗体是以特异性和/或亲和力结合多于一个siglec分子的抗体。例如，单克隆抗体可以与siglec-7和siglec-9交叉反应。术语“特异性结合”意指抗体可以优选地在竞争性结合测定中结合到结合配偶体，例如siglec-7、siglec-9，如使用蛋白质、其中表位的重组形式，或存在于隔离的靶细胞的表面上的天然蛋白质所评估的。用于确定特异性结合的竞争性结合测定和其它方法在下文进一步描述，并且是本领域熟知的。当谈及一种抗体与一种特定的单克隆抗体“竞争”时，意味着抗体使用重组siglec或表面表达的siglec分子在结合测定中与单克隆抗体竞争。例如，如果测试抗体在结合测定中降低参考抗体与siglec多肽或siglec表达性细胞的结合，则称抗体相应地与参考抗体“竞争”。如本文所用，术语“亲和力”是指抗体与表位结合的强度。抗体的亲和力由解离常数kd给出，定义为[ab]×[ag]/[ab-ag]，其中[ab-ag]是抗体-抗原复合物的摩尔浓度，[ab]是未结合的抗体的摩尔浓度，并且[ag]是未结合的抗原的摩尔浓度。亲和力常数ka由1/kd定义。用于确定mab的亲和力的方法可以在以下中找到：harlow等人，《抗体：实验室手册(antibodies:alaboratorymanual)》，冷泉港实验室出版社(coldspringharborlaboratorypress)，冷泉港(coldspringharbor)，纽约，1988)，coligan等人编辑，《免疫学实验指南(currentprotocolsinimmunology)》，格林出版协会和wileyinterscience，纽约，(1992，1993)以及muller，《酶学方法(meth.enzymol.)》92:589-601(1983)，所述参考通过引用全部并入本文。本领域熟知的用于确定mab的亲和力的一种标准方法是使用表面等离子共振(spr)筛选(如通过用biacoretmspr分析装置分析)。在本文的上下文中，“决定簇”表示与多肽相互作用或结合的位点。术语“表位”是指抗原决定簇，并且是抗体结合的抗原上的区域或区域。蛋白质表位可以包括直接参与结合的氨基酸残基以及被特异性抗原结合抗体或肽有效阻断的氨基酸残基，即抗体的“足迹”内的氨基酸残基。它是复杂抗原分子上最简单的形式或最小的结构区域，其可以与例如抗体或受体组合。表位可以是线性的或构象的/结构的。术语“线性表位”定义为由氨基酸的线性序列(一级结构)上连续的氨基酸残基构成的表位。术语“构象或结构表位”定义为由不完全连续的氨基酸残基构成的表位，并且因此代表通过折叠分子而彼此接近的氨基酸的线性序列的分开部分(二级、三级和/或四级结构)。构象表位取决于3维结构。因此，术语‘构象’通常与‘结构’可互换使用。关于siglec表达性细胞(例如表达siglec-7或siglec-9的淋巴细胞)的术语“消耗(deplete)”或“消耗(depleting)”是指导致杀死、消除、裂解或诱导此类杀伤、消除或裂解，从而负面影响样品或受试者中存在的此类siglec表达性细胞的数量的过程、方法或化合物。关于过程、方法或化合物的“非消耗性的”是指过程、方法或化合物未耗尽。术语“试剂”在本文中用于表示化学化合物，化学化合物、生物大分子或由生物材料制成的提取物的混合物。术语“治疗剂”是指具有生物活性的药剂。出于本文的目的，“人源化”或“人”抗体是指其中一种或多种人免疫球蛋白的恒定和可变框架区与动物免疫球蛋白的结合区，例如cdr融合的抗体。设计此类抗体以维持衍生结合区的非人抗体的结合特异性，但是避免针对非人抗体的免疫反应。此类抗体可以从转基因小鼠或已经被“工程化”以响应抗原攻击产生特异性人抗体的其它动物中获得(参见，例如，green等人(1994)《自然遗传学(naturegenet)》7:13；lonberg等人(1994)《自然(nature)》368:856；taylor等人(1994)《国际免疫药理学(intimmun)》6:579，所述文献的全部教导通过引用并入本文)。完全人抗体也可以通过遗传或染色体转染方法以及噬菌体展示技术构建，所有这些都是本领域已知的(参见，例如，mccafferty等人(1990)《自然(nature)》348:552-553)。人抗体也可以由体外活化的b细胞产生(参见，例如，美国专利第5,567,610号和第5,229,275号，所述专利通过引用以其整体并入)。“嵌合抗体”是抗体分子，其中(a)恒定区或其部分被改变、替换或交换，使得抗原结合位点(可变区)连接到不同或改变的类、效应功能和/或物种、或赋予嵌合抗体新特性的完全不同的分子，例如酶、毒素、激素、生长因子、药物等的恒定区；或(b)可变区或其部分被具有不同或改变的抗原特异性的可变区改变、替换或交换。当在本文中使用时，术语“高变区”是指抗体中负责抗原结合的氨基酸残基。高变区通常包括来自“互补决定区”或“cdr”的氨基酸残基(例如，轻链可变结构域中的残基24-34(l1)、50-56(l2)和89-97(l3)以及重链可变结构域中的31-35(h1)、50-65(h2)和95-102(h3)；kabat等人1991)和/或来自“高变环”的那些残基(例如，轻链可变结构域中的残基26-32(l1)、50-52(l2)和91-96(l3)以及重链可变结构域中的26-32(h1)、53-55(h2)和96-101(h3)；chothia和lesk，《分子生物学杂志(j.mol.biol)》1987；196:901-917)，或用于确定负责抗原结合的必需氨基酸的类似系统。通常，此区域中氨基酸残基的编号通过kabat等人，同上所述的方法进行。如“kabat位置”、“如kabat中的可变结构域残基编号”和“根据kabat”等短语在本文中是指用于重链可变结构域或轻链可变结构域的此编号系统。使用kabat编号系统，肽的实际线性氨基酸序列可以含有较少或额外的氨基酸，对应于可变结构域的fr或cdr的缩短或插入。例如，重链可变结构域可以包含在cdrh2的残基52之后的单个氨基酸插入物(根据kabat的残基52a)和在重链fr残基82之后的插入残基(例如，根据kabat的残基82a、82b和82c等)。通过将抗体序列的同源区域与“标准”kabat编号序列比对，可以确定给定抗体的kabat残基编号。如本文所用，“框架”或“fr”残基是指除了定义为cdr的那些区域之外的抗体可变结构域的区域。每个抗体可变结构域框架可以进一步细分为由cdr分开的连续区域(fr1、fr2、fr3和fr4)。术语“fc结构域”、“fc部分”和“fc区”是指抗体重链的c末端片段，例如，来自人γ(γ)重链的约氨基酸(aa)230到约aa450，或其在其它类型的抗体重链中的对应序列(例如，人抗体的α、δ、ε和μ)，或其天然存在的同种异型。除非另有说明，否则在本公开全文中使用免疫球蛋白的普遍接受的kabat氨基酸编号(参见kabat等人(1991)《免疫学目的蛋白质的序列》，第5版，美国公共卫生局，美国国立卫生研究院，马里兰州，贝塞斯达)。术语“隔离的”、“纯化的”或“生物学上纯的”是指基本上或基本上不含在其天然状态下发现的通常伴随其的组分的材料。纯度和均匀性通常使用分析化学技术，如聚丙烯酰胺凝胶电泳或高效液相色谱法确定。作为制剂中存在的主要物质的蛋白质是基本上纯化的。术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用，指氨基酸残基的聚合物。术语适用于氨基酸聚合物，以及天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚合物，其中一个或多个氨基酸残基是对应天然存在的氨基酸的人工化学模拟物。当与参考例如细胞、或核酸、蛋白质或载体一起使用时，术语“重组”表示已经通过引入异源核酸或蛋白质、或对天然核酸或蛋白质的改变修饰了细胞、核酸、蛋白质或载体，或细胞衍生自如此修饰的细胞。因此，例如，重组细胞表达在天然(非重组)形式的细胞内未发现的基因，或表达以其它方式异常表达、表达不足或根本不表达的天然基因。在本文的上下文中，术语“结合”多肽或表位的抗体表示以特异性和/或亲和力结合所述决定簇的抗体。当在两个或更多个多肽的序列之间的关系中使用时，术语“同一性”或“相同的”是指多肽之间的序列相关性程度，如通过两个或更多个氨基酸残基的串之间的匹配数测定的。“同一性”测量两个或更多个序列中较小的序列之间相同匹配的百分比，其中间隙比对(如果有的话)由特定数学模型或计算机程序(即“算法”)解决。通过已知方法可以容易地计算相关多肽的同一性。此类方法包含但不限于以下中描述的那些：《计算分子生物学(computationalmolecularbiology)》，lesk,a.m.编辑，牛津大学出版社，纽约，1988；《生物计算：信息学和基因组计划(biocomputing:informaticsandgenomeprojects)》，smith,d.w.编辑，学术出版社，纽约，1993；《序列数据的计算机分析(computeranalysisofsequencedata)》，第1部分，griffin,a.m.和griffin,h.g.编辑，humanapress，新泽西，1994；《分子生物学中的序列分析(sequenceanalysisinmolecularbiology)》，vonheinje,g.，学术出版社，1987；《序列分析引物(sequenceanalysisprimer)》，gribskov,m.和devereux,j.编辑，m.stocktonpress，纽约，1991；和carillo等人，《工业与应用数学学会应用数学杂志(siamj.appliedmath.)》48,1073(1988)。设计用于确定同一性的方法以给出测试序列之间的最大匹配。在公开可用的计算机程序中描述了确定同一性的方法。用于确定两个序列之间的同一性的计算机程序方法包含gcg程序包，包含gap(devereux等人，《核酸研究(nucl.acid.res.)》12,387(1984)；遗传学计算机组，威斯康星大学，麦迪逊，威斯康星州)，blastp、blastn和fasta(altschul等人，《分子生物学杂志(j.mol.biol.)》215,403-410(1990))。blastx程序可从国家生物技术信息中心(ncbi)和其它来源公开获得(blastmanual，altschul等人，ncb/nlm/nihbethesda，md.20894；altschul等人，同上)。众所周知的smithwaterman算法也可以用于确定同一性。生产抗体可用于治疗疾病(例如癌症、传染病)的抗siglec剂结合人siglec-9蛋白的细胞外部分(并且任选地进一步结合人siglec-7蛋白，有或没有进一步的siglec-12结合)并且降低在siglec阳性免疫细胞的表面上表达的人siglec的抑制活性。在一个实施例中，试剂抑制唾液酸分子通过嗜中性粒细胞、树突细胞、巨噬细胞、m2巨噬细胞、nk细胞和/或cd8 t细胞中的siglec引起抑制性信号传导的能力。在一个实施例中，本文所述的抗siglec剂可以用于增加人体中或来自人类供体的nk细胞和/或嗜中性粒细胞对带有siglec的配体的靶细胞(例如癌细胞)的细胞毒性。nk细胞和嗜中性粒细胞是识别并且直接杀死微生物和癌细胞的专门的粒细胞。示出肿瘤细胞的表面处表达的唾液酸降低了nk细胞对肿瘤细胞的细胞毒性。抗体可以用于增强nk细胞的细胞毒性，例如将细胞毒性的水平恢复到基本上在其表面不表达特定siglec的nk细胞或嗜中性粒细胞中观察到的所述水平。唾液酸还在树突细胞上高表达，并且已经被描述为调节几种dc功能，包含对tlr刺激的响应性。唾液酸合成的阻断降低了用于tlr刺激的modc的活化阈值，并且siglec-e缺失增强了树突细胞对几种微生物tlr配体的反应。siglec-9是小鼠中siglec-e的最接近的人类直系同源成员，阻断性的抗siglec-9抗体可以增强树突细胞的活化并且调节dc-t相互作用。用唾液酸修饰抗原调节抗原特异性调节性t(treg)细胞的产生，并且防止通过树突细胞形成效应cd4 和cd8 t细胞。树突细胞的吞噬能力还可以通过a2,6-唾液酸缺乏来改善。siglec-7和-9两者都在m1和m2型巨噬细胞上表达，并且siglec-9的敲低已经被描述为调节各种表面表达标志物(例如ccr7和cd200r)，暗示siglec-9对巨噬细胞功能的调节。实际上，在巨噬细胞系中转染了各种siglec-9突变体(itim结构域中的突变)，并且证明siglec-9增强了抗炎细胞因子il-10的产生。siglec-9与可溶性配体的结合还可以诱导巨噬细胞显示肿瘤相关的巨噬细胞样表型，增加检查点配体pd-l1的表达。在一个实施例中，试剂与唾液酸分子竞争结合siglec，即，试剂阻断siglec与其唾液酸配体之间的相互作用。在本发明的一方面，试剂是选自全长抗体、抗体片段和合成或半合成抗体衍生分子的抗体。在本发明的一方面，试剂是选自完全人抗体、人源化抗体和嵌合抗体的抗体。在本发明的一方面，试剂是选自iga、igd、igg、ige和igm抗体的抗体的片段。在本发明的一方面，试剂是包括选自igg1、igg2、igg3和igg4的恒定结构域的抗体的片段。在本发明的一方面，试剂是选自以下的抗体片段：fab片段、fab'片段、fab'-sh片段、f(ab)2片段、f(ab')2片段、fv片段、重链ig(美洲驼或骆驼ig)、vhh片段、单结构域fv和单链抗体片段。在本发明的一方面，试剂是合成或半合成抗体衍生的分子，其选自scfv、dsfv、微抗体、双抗体、三抗体、κ体、ignar和多特异性抗体。因此，本发明涉及结合siglec的抗体和抗原结合结构域(和包括前述的多肽)。一方面，抗体或抗原结合结构域以比另外的人siglec，例如siglecs-3、-5、-6、-8、-10、-11和/或-12低至少100倍的结合亲和力(例如kd)结合siglec-7和/或-9。一方面，抗体或抗原结合结构域结合siglec-9，但是不结合siglec-7；在一个实施例中，抗体以比人siglec-7多肽低至少100倍的结合亲和力(例如，kd)结合人siglec-9多肽。另一个方面，抗体以彼此相差不大于1个对数的结合亲和力(例如kd)结合人siglec-9多肽和人siglec-7多肽两者，并且其中所述siglec-7和siglec-9的结合亲和力比另外的人siglec，例如siglec-3、-5、-6、-8、-10、-11和/或-12低至少100倍。亲和力可以例如通过表面等离子体共振确定，以结合重组siglec多肽。在本发明的一方面，抗体呈纯化或至少部分纯化的形式。在本发明的一方面，抗体基本上呈隔离的形式。可以通过本领域已知的多种技术产生抗体。典型地，通过用包括siglec多肽，优选地人siglec多肽的免疫原免疫非人动物，优选地小鼠产生它们。siglec多肽可以包括人siglec-9和/或siglec-7多肽，或其片段或衍生物，通常是免疫原性片段的全长序列，即，包括暴露于表达siglec多肽的细胞的表面上的表位的多肽的一部分。此类片段通常含有成熟多肽序列的至少约7个连续氨基酸，甚至更优选地其至少约10个连续氨基酸。片段通常基本上衍生自受体的细胞外结构域。在一个实施例中，免疫原包括脂质膜中的野生型人siglec多肽，通常在细胞表面。在具体实施例中，免疫原包括任选地处理或裂解的完整细胞，特别是完整的人细胞。在另一个实施例中，多肽是重组siglec多肽。用抗原免疫非人哺乳动物的步骤可以以本领域熟知的任何方式进行，用于刺激小鼠中抗体的产生(参见，例如，e.harlow和d.lane，《抗体：实验室手册(antibodies：alaboratorymanual.)》，纽约冷泉港冷泉港实验室出版社，(1988)，其全部公开内容通过引用并入本文)。将免疫原悬浮或溶解在缓冲液中，任选地与佐剂，如完全或不完全的弗氏佐剂一起。用于确定免疫原的量、缓冲液的类型和佐剂的量的方法是本领域技术人员众所周知的，并且不以任何方式进行限制。对于不同的免疫原，这些参数可能有所不同，但是很容易阐明。类似地，足以刺激抗体产生的免疫位置和频率也是本领域众所周知的。在典型的免疫方案中，非人动物在第1天和约一周后再次腹膜内注射抗原。随后在第20天左右召回抗原注射，任选地与如不完全弗氏佐剂等佐剂一起注射。召回注射是静脉内进行的，并且可以连续数天重复进行。随后在第40天，通常在没有佐剂的情况下静脉内或腹膜内加强注射。此方案导致约40天之后产生产生抗原特异性抗体的b细胞。也可以使用其它方案，只要它们导致产生表达针对免疫中所用抗原的抗体的b细胞即可。在替代性实施例中，分离来自非免疫非人类哺乳动物的淋巴细胞，使其在体外生长，并且然后在细胞培养物中暴露于免疫原。然后收集淋巴细胞，并且进行下述融合步骤。对于单克隆抗体，下一个步骤是从免疫的非人类哺乳动物中分离脾细胞，并且随后将这些脾细胞与永生化细胞融合，以形成产生抗体的杂交瘤。从非人类哺乳动物中分离脾细胞是本领域众所周知的，并且通常涉及从麻醉的非人类哺乳动物中除去脾脏，将其切割成小块，并且通过细胞过滤网的尼龙网，将来自脾脏的脾细胞挤压到合适的缓冲液中，以产生单个细胞悬浮液。将细胞洗涤、离心并且重悬于裂解任何红细胞的缓冲液中。再次离心溶液，并且最后将沉淀中剩余的淋巴细胞重悬于新鲜缓冲液中。一旦分离并且存在于单细胞悬浮液中，淋巴细胞可以融合到永生细胞系。尽管本领域已知许多其它可用于产生杂交瘤的永生细胞系，但是这通常是小鼠骨髓瘤细胞系。鼠类骨髓瘤细胞系包含但不限于可从美国圣地亚哥的salk研究所细胞分配中心获得的mopc-21和mpc-11小鼠肿瘤，可从美国马里兰州罗克维尔市的美国典型培养物收集获得的x63ag8653和sp-2细胞衍生的那些。使用聚乙二醇等进行融合。然后，使所得杂交瘤在含有抑制未融合的亲代骨髓瘤细胞的生长或存活的一种或多种物质的选择性培养基中生长。例如，如果亲代骨髓瘤细胞缺乏次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(hgprt或hprt)，则杂交瘤的培养基通常将包含次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸苷(hat培养基)，所述物质阻止hgprt缺陷型细胞的生长。杂交瘤通常生长于巨噬细胞的饲养层上。巨噬细胞优选地来自用于分离脾细胞的非人类哺乳动物的同窝幼虫，并且通常在铺板杂交瘤之前几天，用不完全弗氏佐剂等引发。融合方法描述于goding，“单克隆抗体：原理和实践(monoclonalantibodies:principlesandpractice)”，第59-103页(学术出版社，1986)，所述文献的公开内容通过引用并入本文。使细胞在选择培养基中生长足够的时间，以用于菌落形成和抗体产生。这通常介于约7天到约14天之间。然后测定杂交瘤菌落产生特异性结合siglec多肽基因产物的抗体。测定通常是比色elisa型测定，尽管可以采用可以适合杂交瘤生长的孔的任何测定。其它测定包含放射免疫测定法或荧光活化细胞分选。检查所需抗体产生阳性的孔，以确定是否存在一个或多个不同的菌落。如果存在多于一个菌落，则可以将细胞重新克隆并且生长，以确保仅单个细胞已经产生了产生所需抗体的菌落。通常，还将测试抗体结合siglec多肽，例如siglec表达性细胞的能力。可以在适当的培养基，如dmem或rpmi-1640中大量生长已证实产生单克隆抗体的杂交瘤。替代性地，杂交瘤细胞可以在动物中作为腹水肿瘤在体内生长。在充分生长以产生所需的单克隆抗体之后，将含有单克隆抗体(或腹水)的生长培养基与细胞分离，并且纯化其中存在的单克隆抗体。纯化通常是通过凝胶电泳、渗析、使用蛋白a或蛋白g琼脂糖或连接固相支持物，如琼脂糖或琼脂糖珠的抗小鼠ig色谱法来实现的(全部描述于例如《抗体纯化手册(antibodypurificationhandbook)》中，生物科学，出版号18-1037-46，ac版，所述文献的公开内容通过引用并入本文)。通常通过使用低ph缓冲液(ph等于或小于3.0的甘氨酸或乙酸盐缓冲液)从蛋白a/蛋白g柱上洗脱结合抗体，立即中和含抗体的馏分。根据需要将这些馏分合并、透析和浓缩。通常重新克隆和重新测定具有单个表观菌落的阳性孔，以确保仅检测和产生一种单克隆抗体。抗体也可以通过选择免疫球蛋白的组合文库产生，例如在(ward等人《自然(nature)》，341(1989)第544页，其全部公开内容通过引用并入本文)中所公开。可以在siglec上滴定抗体，以获得达到与siglec多肽最大结合所需的浓度。关于结合siglec多肽(或表达此类的细胞)的“ec50”是指有效浓度的抗siglec抗体，其相对于结合siglec多肽(或表达此类的细胞)产生其最大应答或效应的50％。一旦标识出能够结合siglec和/或具有其它所需特性的抗体，通常还将使用包含本文所述的那些的标准方法评估它们结合其它多肽，包含其它siglec多肽和/或无关多肽的能力。理想地，抗体仅以实质亲和力结合siglec，例如人siglec-7和/或人siglec-9，并且不以显著水平结合无关多肽，特别是除cd33相关的siglec以外的多肽或除所需siglec以外的siglec(例如，siglec-7和/或siglec-9)。然而，可以理解，只要siglec的亲和力比其它siglec和/或其它无关多肽的亲和力基本上大(例如，5倍、10倍、50倍、100倍、500倍、1000倍、10,000倍或更多)，然后抗体适用于本方法中。抗siglec抗体可以制备为非消耗性抗体，使得它们已经减少或基本上缺乏特异性结合人fcγ受体。此类抗体可以包括已知不结合或与fcγ受体具有低结合亲和力的各种重链的恒定区。一个此类实例是人igg4恒定区。替代性地，不包括恒定区的抗体片段，如fab或f(ab')2片段，可以用于避免fc受体结合。可以根据本领域已知的方法评估fc受体结合，包含例如在biacore测定中测试抗体与fc受体蛋白的结合。而且，可以使用任何抗体同种型，其中fc部分被修饰，以最小化或消除与fc受体的结合(参见，例如，wo03101485，其公开内容通过引用并入本文)。如例如基于细胞的测定等用于评估fc受体结合的测定在本领域中是公知的，并且描述于，例如wo03101485中。从杂交瘤中分离编码结合siglec多肽上存在的表位的抗体的dna，并且将其置于合适的表达载体中，以转染到合适的宿主中。然后，将宿主用于重组产生抗体或其变体，如所述单克隆抗体的人源化形式、抗体的活性片段、包括抗体的抗原识别部分的嵌合抗体、或包括可检测部分的形式。编码单克隆抗体的dna可以容易地分离，并且使用常规方法测序(例如，通过使用能够特异性地结合到编码鼠抗体的重链和轻链的基因的寡核苷酸探针)。分离后，可以将dna置于表达载体中，然后将其转染到宿主细胞中，如大肠杆菌细胞、猿猴cos细胞、中国仓鼠卵巢(cho)细胞或不以其它方式产生免疫球蛋白的骨髓瘤细胞，以获得重组宿主细胞中单克隆抗体的合成。如本说明书中其它地方所述，可以修饰此类dna序列用于任何大量目的，例如用于人源化抗体、产生片段或衍生物、或用于修饰抗体的序列，例如在抗原结合位点中，以优化抗体的结合特异性。编码抗体的dna在细菌中的重组表达是本领域熟知的(参见，例如，skerra等人，《免疫学最新观点(curr.opinioninimmunol.)》第5期，第256页(1993)；以及pluckthun，《免疫学(immunol.)》第130期，第151页，(1992))。在本发明的上下文中，“共同决定簇”表示由人类抑制性siglec受体，特别是cd33相关的siglec的几种基因产物所共有的决定簇或表位。抗体可以结合至少由siglec-7和siglec-9共有的共同决定簇。在一个实施例中，在cd33相关的siglec中的一个或多个或全部上，特别是siglec-3、-5、-6、-8、-10、-11和-12任选地不存在共同决定簇。在一个实施例中，在siglec-3、-5、-6、-8、-10、-11和-12上不存在共同决定簇。可以使用其中可以评估抗体竞争的多种免疫学筛查测定中的任一种，轻松确定对结合siglec多肽(例如，siglec-7和/或siglec-9，特别是与单克隆抗体mabsa、-b、-c、-d、-e或-f(siglec-9特异性)或mabs1、-2、-3、-4、-5或-6(siglec-7/9特异性)基本上或本质上相同的表位)的一种或多种抗体的识别。许多此类测定是常规实践的，并且在本领域中是众所周知的(参见，例如，美国专利第5,660,827号，所述专利通过引用并入本文)。应当理解，实际上确定本文所述的抗体结合的表位并不需要以任何方式识别结合与本文所述的单克隆抗体相同或实质上相同的表位的抗体。例如，在从不同的来源动物获得待检测的测试抗体，或者甚至是不同的ig同种型的情况下，可以使用简单的竞争测定，其中混合(或预先吸附)对照(例如，maba、-b、-c、-d、-e或-f或mab1、-2、-3、-4、-5或-6)和测试抗体，并且施加到含有siglec多肽的样品上。基于蛋白质印迹的方案和biacore分析的使用适用于此类竞争研究。在某些实施例中，在应用于siglec抗原样品之前，将对照抗体(例如，maba、-b、-c、-d、-e或-f或mab1、-2、-3、-4、-5或-6)与不同量的测试抗体(例如，约1:10或约1:100)预混合一段时间。在其它实施例中，可以在暴露于siglec抗原样品期间，简单地混合对照和不同量的测试抗体。只要可以区分结合的抗体和游离的抗体(例如，通过使用分离或洗涤技术消除未结合的抗体)以及区分maba、-b、-c、-d、-e、-f、-1、-2、-3、-4、-5或-6和测试抗体(例如，通过使用物种特异性或同种型特异性二抗，或通过用可检测标记特异性标记maba、-b、-c、-d、-e、-f、-1、-2、-3、-4、-5或-6)，可以确定测试抗体是否减少了maba、-b、-c、-d、-e、-f、-1、-2、-3、-4、-5或-6与抗原的结合，表示测试抗体竞争结合和/或将siglec上的共同结合位点识别为mab1、maba、-b、-c、-d、-e、-f、-1、-2、-3、-4、-5或-6。在不存在完全不相关的抗体的情况下，(标记的)对照抗体的结合可以作为对照高值。通过将标记的(maba、-b、-c、-d、-e、-f、-1、-2、-3、-4、-5或-6)抗体与完全相同类型的未标记抗体(maba、-b、-c、-d、-e、-f、-1、-2、-3、-4、-5或-6)一起温育获得对照低值，其中将发生竞争并且降低标记抗体的结合。在测试测定中，在存在测试抗体的情况下标记抗体反应性的显著降低表明测试抗体识别siglec上的基本相同区域，并且与标记的抗体(maba、-b、-c、-d、-e、-f、-1、-2、-3、-4、-5或-6)“交叉反应”或竞争。以介于约1:10与约1:100之间maba、-b、-c、-d、-e、-f、-1、-2、-3、-4、-5或-6:测试抗体的任何比率，将maba、-b、-c、-d、-e、-f、-1、-2、-3、-4、-5或-6与siglec抗原的结合减少至少约50，如至少约60％，或更优选地，至少约80％或90％(例如约65％-100％)的任何测试抗体被认为是与相应的maba、-b、-c、-d、-e、-f、-1、-2、-3、-4、-5或-6竞争的抗体。优选地，此类测试抗体将相应的maba、-b、-c、-d、-e、-f、-1、-2、-3、-4、-5或-6与siglec抗原的结合降低至少约90％(例如，约95％)。还可以通过例如流式细胞术测试评估竞争。在此类测试中，携带一种或多种给定siglec多肽的细胞可以首先与maba、-b、-c、-d、-e、-f、-1、-2、-3、-4、-5或-6一起温育，例如，并且然后与用荧光染料或生物素标记的测试抗体一起温育。如果与饱和量的maba、-b、-c、-d、-e、-f、-1、-2、-3、-4、-5或-6一起预温育获得的结合是通过未与相应的maba、-b、-c、-d、-e、-f、-1、-2、-3、-4、-5或-6一起预温育的抗体获得的结合(如通过荧光的平均值测定)的约80％、优选地约50％、约40％或更低(例如，约30％、20％或10％)，则称抗体与maba、-b、-c、-d、-e、-f、-1、-2、-3、-4、-5或-6竞争。替代性地，如果在与饱和量的测试抗体一起预温育的细胞上用相应的标记的maba、-b、-c、-d、-e、-f、-1、-2、-3、-4、-5或-6抗体(通过荧光染料或生物素)获得的结合是未与测试抗体一起预温育获得的结合的约80％、优选地约50％、40％或更少(例如，约30％、20％或10％)，则称抗体与maba、-b、-c、-d、-e、-f、-1、-2、-3、-4、-5或-6竞争。还可以使用简单的竞争测定，其中测试抗体被预吸附，并且以饱和浓度施加到其上固定siglec抗原的表面。简单竞争测定中的表面优选地是biacore芯片(或适用于表面等离子共振分析的其它介质)。然后使对照抗体(例如，maba、-b、-c、-d、-e、-f、-1、-2、-3、-4、-5或-6)以siglec饱和浓度与表面接触，并且测量siglec和对照抗体的表面结合。在不存在测试抗体的情况下，将对照抗体的此结合与对照抗体与含siglec表面的结合进行比较。在测试测定中，在存在测试抗体的情况下，对照抗体对含siglec的表面的结合显著降低，这表明测试抗体竞争结合，并且因此可以识别siglec上与对照抗体相同的区域，从而使测试抗体与对照抗体“交叉反应”。使对照(如maba、-b、-c、-d、-e、-f、-1、-2、-3、-4、-5或-6)抗体与siglec抗原的结合降低至少约30％或更多，优选地约40％的任何测试抗体可以被认为是竞争结合作为对照的siglec的抗体(例如，相应的maba、-b、-c、-d、-e、-f、-1、-2、-3、-4、-5或-6)。优选地，此类测试抗体将使对照抗体(例如，maba、-b、-c、-d、-e、-f、-1、-2、-3、-4、-5或-6)与siglec抗原的结合降低至少约50％(例如，至少约60％、至少约70％或更多)。应当理解，对照抗体和测试抗体的顺序可以颠倒：即，可以首先使对照抗体结合到表面，并且然后在竞争测定中使测试抗体与表面接触。优选地，对siglec抗原具有较高亲和力的抗体首先结合表面，因为预期第二抗体所见的结合降低(假设抗体交叉反应)将具有更大的量级。此类测定的另外实例提供于例如saunal(1995)《免疫法杂志(j.immunol.methods)》183:33-41，其公开内容通过引用并入本文。确定抗体是否在表位区内结合可以以本领域技术人员已知的方式进行。作为此类作图/表征方法的一个实例，抗siglec抗体的表位区可以通过使用siglec蛋白中暴露的胺/羧基的化学修饰的表位“足印”确定。此类足印技术的一个具体实例是使用hxms(通过质谱法检测的氢-氘交换)，其中发生受体和配体蛋白酰胺质子的氢/氘交换、结合和反向交换，其中参与蛋白质结合的主链酰胺基受到保护免于反向交换，并且因此将保持氘代。此时，可以通过消化蛋白水解、快速微孔高效液相色谱分离和/或电喷雾电离质谱法标识相关区域。参见，例如，ehringh，《分析生物化学(analyticalbiochemistry)》，第267卷，(第2期)第252-259页(1999)engen,j.r.和smith,d.l.(2001)《分析化学(anal.chem.)》73，256a-265a。合适的表位标识技术的另一个实例是核磁共振表位作图(nmr)，其中通常比较游离抗原和与抗原结合肽复合的抗原，如抗体的二维nmr谱中信号的位置。通常用15n选择性地同位素标记抗原，使得在nmr谱中仅看到对应于抗原的信号，并且看不到来自抗原结合肽的信号。源自参与与抗原结合肽相互作用的氨基酸的抗原信号通常将在复合物的光谱中与游离抗原的光谱相比移位，并且可以以所述方式标识参与结合的氨基酸。参见，例如，ernstscheringresfoundworkshop.2004；(44):149-67；huang等人，《分子生物学期刊(journalofmolecularbiology)》第281卷(第1期)第61-67页(1998)；以及saito和patterson，《方法(methods)》1996年6月；9(3):516-24。也可以使用质谱法进行表位作图/表征。参见，例如，downard，《质谱学杂志(jmassspectrom.)》2000年4月；35(4):493-503以及kiselar和downard，《分析化学(analchem.)》1999年5月1日；71(9):1792-1801。蛋白酶消化技术也可以用于表位作图和标识。抗原决定簇相关区域/序列可以通过蛋白酶消化确定，例如通过以约1:50的比率使用胰蛋白酶与siglec或在ph7-8下消化o/n，随后进行用于肽标识的质谱(ms)分析。随后可以通过将经历胰蛋白酶消化的样品和与抗体一起温育，并且然后通过例如胰蛋白酶消化的样品进行比较，标识通过抗siglec结合剂保护免受胰蛋白酶切割的肽(从而揭示粘合剂的足迹)。其它酶如胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶等也可以或替代性地用于类似的表位表征方法中。此外，酶促消化可以提供用于分析潜在的抗原决定簇序列是否在siglec多肽的未表面暴露的区域内的快速方法，并且因此，在免疫原性/抗原性方面最可能不相关。定点诱变是可用于阐明结合表位的另一种技术。例如，在“丙氨酸扫描”中，蛋白质区段内的每个残基用丙氨酸残基取代，并且测量结合亲和力的结果。如果突变导致结合亲和力显著降低，则很可能参与结合。对结构表位特异的单克隆抗体(即，不结合未折叠蛋白质的抗体)可以用于验证丙氨酸取代不影响蛋白质的总体折叠。参见，例如，clackson和wells，《科学(science)》1995；267:383–386；以及wells，《美国国家科学院院报(procnatlacadsciusa)》1996；93:1–6。电子显微镜也可以用于表位“足印”。例如，wang等人，《自然(nature)》1992；355:275-278使用冷冻电镜术、三维图像重建和x射线晶体学的协调应用，以确定fab片段在天然豇豆花叶病毒的衣壳表面上的物理足迹。用于表位评估的其它形式的“无标记”测定包含表面等离子共振(spr，biacore)和反射干涉光谱(rifs)。参见，例如，等人，《分子识别杂志(journalofmolecularrecognition)》1990；3:208-14；nice等人，《色谱期刊(j.chromatogr.)》1993；646:159-168；leipert等人，《应用化学国际版(angew.chem.int.ed.)》1998；37:3308–3311；等人，《生物传感器和生物电子学(biosensorsandbioelectronics)》2002；17:937-944。还应注意，可以在本文所述的示例性竞争测定中的一种或多种测定中，标识结合与本发明的抗体相同或基本相同的表位的抗体。交叉阻断测定也可以用于评估测试抗体是否影响天然或非天然唾液酸配体与人siglec(例如，siglec-7和/或siglec-9)的结合。例如，为了确定人源化的抗siglec抗体制剂是否减少或阻断了siglec-7与唾液酸的相互作用，可以进行以下测试：将一定剂量范围的抗人siglec-9fab与固定剂量的人siglec-fc(例如，siglec-7fc和/或siglec-9fc)在室温下共温育30分钟，然后加入表达细胞系的唾液酸配体，持续1h。在染色缓冲液中洗涤细胞两次之后，将在染色缓冲液中稀释的pe偶联的山羊抗小鼠iggfc片段二抗添加到细胞中，并且将平板在4℃下再温育30分钟。将细胞洗涤两次，并且在配备有htfc酶标仪的accuryc6流式细胞仪上进行分析。在不存在测试抗体的情况下，siglec-fc结合细胞。在与阻断siglec与唾液酸的结合的siglec-fc(例如，siglec-7fc和/或siglec-9fc)预先温育的抗体制剂的存在下，siglec-fc与细胞的结合减少。然而，应该理解，可以直接评估nk细胞对唾液酸配体表达性靶细胞的裂解活性的重建，而无需评估对siglec唾液酸配体相互作用的阻断。任选地，本公开的抗体可以被指定为除了抗体e10-286(bdbiosciences公司)、欧洲专利1238282b1中公开的qa79(moretta等人，热那亚大学)或falco等人(1999)《实验医学期刊(j.exp.med.)》190:793-801中引用的z176，或前述的衍生物中的任何一种或多种以外的抗体，例如，其全部或部分包括抗原结合区或重链和/或轻链cdr。任选地，可以将本公开的抗体指定为除了于2015年9月9日提交的pct申请第pct/ep2015/070550号中公开的抗体3a11、1h9和2b4中的任何一种或多种以外的抗体(innatepharma)。在其它实施例中，上述抗体可以根据抗体的性质被修饰，以便具有本公开的抗体的特性。本文提供了抗体，其结合细胞外结构域，例如n末端v集结构域或人siglec-9的ig样c2型结构域1或2，例如结合本文实例中示出的表位的抗体。一方面，抗体结合与抗体mab1、-2、-3、-4、-5、-6、-a、-b、-c、-d、-e或-f基本上相同的表位。在一个实施例中，抗体结合siglec-9和/或siglec-7的表位，其至少部分地与抗体mab1、-2、-3、-4、-5、-6、-a、-b、-c、-d、-e或-f结合的表位重叠，或包含其中的至少一个残基。可以将抗体结合的残基指定为存在于siglec-9和/或siglec-7多肽的表面上，例如在细胞表面上表达的siglec-9或siglec-7多肽中。在由抗体结合的siglec-9和/或siglec-7上的氨基酸残基可以例如选自由表3中列出的残基组成的组。可以测量抗siglec抗体与用siglec-9突变体转染的细胞的结合，并且与抗siglec抗体结合野生型siglec-9多肽(例如，seqidno:2)的能力进行比较。对于另外结合siglec-7的抗体，可以另外或替代性地使用用(例如表3的)siglec-7突变体转染了的细胞进行抗siglec抗体的结合，并且与抗siglec抗体结合野生型siglec-7多肽(例如，seqidno:1)的能力进行比较。抗siglec抗体与突变体siglec-9和/或siglec-7多肽(例如，表3的突变体siglec-9或siglec-7)之间的结合降低意味着结合亲和力降低(例如，如通过已知方法，如表达特定突变体的细胞的facs测试，或通过结合突变体多肽的biacoretm(spr)测试所测量)和/或抗siglec抗体的总结合能力的降低(例如，如通过抗siglec抗体浓度对多肽浓度的图中bmax的降低所证明)。结合的显著降低表明，当抗siglec抗体结合siglec-9时，突变残基直接参与抗siglec抗体的结合或与结合蛋白紧密接近。在一些实施例中，结合的显著降低意指相对于抗体与野生型siglec-9多肽之间的结合，抗siglec抗体与突变体siglec-9多肽之间的结合亲和力和/或能力降低大于40％、大于50％、大于55％、大于60％、大于65％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％。在某些实施例中，结合降低到可检测限度以下。在一些实施例中，当抗siglec抗体与突变体siglec-9多肽的结合小于抗siglec抗体与野生型siglec-9多肽之间观察到的结合的50％(例如，小于45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％或10％)时，证明结合显著降低。在一些实施例中，提供了抗siglec抗体，其表现出对突变体siglec-9和/或siglec-7多肽的结合显著降低，其中包括通过抗体mab1、-2，-3，-a，-b，-c，-d，-e或-f结合的氨基酸残基的区段中的残基被不同的氨基酸取代。在一个实施例中，与结合野生型siglec多肽(例如，seqidno:2的siglec-9多肽)相比，突变体是选自表3的突变体m6、m7、m8、m9、m10、m11、m14、m15和m16的突变体。在一个实施例中，与结合野生型siglec-7多肽(例如，seqidno:1的多肽)相比，突变体是选自表3的突变体m6、m7、m8、m9、m10、m11、m14、m15和m16的突变体。在一个实施例中，当作为fab'片段测试时，与结合seqidno:2的野生型siglec-9多肽相比，抗siglec抗体表现出对表3的突变体siglec-9多肽m7和m6中的每一种的结合显著降低。在一个实施例中，当作为fab'片段测试时，与结合seqidno:2的野生型siglec-9多肽相比，抗siglec抗体表现出对表3的突变体siglec-9多肽m7、m9、m10和m11中的每一种的结合显著降低。在一个实施例中，当作为fab'片段测试时，与结合seqidno:2的野生型siglec-9多肽相比，抗siglec抗体表现出对表3的突变体siglec-9多肽m8、m9、m10和m11中的每一种的结合显著降低。在一个实施例中，当作为fab'片段测试时，与结合seqidno:2的野生型siglec-9多肽相比，抗siglec抗体表现出对表3的突变体siglec-9多肽m16和m14中的每一种的结合显著降低。在一个实施例中，当作为fab'片段测试时，与结合seqidno:2的野生型siglec-9多肽相比，抗siglec抗体表现出对表3的突变体siglec-9多肽m16和m8中的每一种的结合显著降低。在一个实施例中，当作为fab'片段测试时，与结合seqidno:2的野生型siglec-9多肽相比，抗siglec抗体表现出对表3的突变体siglec-9多肽m16、m15和m8中的每一种的结合显著降低。在一个实施例中，当作为fab'片段测试时，与结合seqidno:2的野生型siglec-9多肽相比，抗siglec抗体表现出对表3的突变体siglec-9多肽m16、m15、m14和m8中的每一种的结合显著降低。一方面，抗siglec抗体结合人siglec-9上的表位，其包括选自由以下组成的组的残基中的一个、两个、三个、四个、五个或六个：n78、p79、a80、r81、a82和/或v83(参考seqidno:2)。一方面，抗siglec抗体结合人siglec-9上的表位，其包括选自由以下组成的组的残基中的一个、两个、三个或四个：n77、d96、h98和/或t99(参考seqidno:2)。一方面，抗siglec抗体结合人siglec-9上的表位，其包括选自由以下组成的组的残基中的一个、两个、三个或四个：w84、e85、e86和/或r88(参考seqidno:2)。一方面，抗siglec抗体结合人siglec-9上的表位，其包括选自由以下组成的组的残基中的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个或八个：s47、h48、g49、w50、i51、y52、p53和/或g54(参考seqidno:2)。一方面，抗siglec抗体结合人siglec-9上的表位，其包括残基k131和/或h132中的一个或两个(参考seqidno:2)。一方面，抗siglec抗体结合人siglec-9上的表位，其包括残基r120、w128和/或n129a中的一个或两个(参考seqidno:2)。一方面，抗siglec抗体结合人siglec-9上的表位，其包括残基s27、r116、h133和/或r134中的一个或两个(参考seqidno:2)。一方面，抗siglec抗体结合人siglec-9上的表位，其包括选自由以下组成的组的残基中的一个、两个、三个、四个、五个、六个或七个：r63、a66、n67、t68、d69、q70和/或d71(参考seqidno:2)。一方面，抗siglec抗体结合人siglec-9上的表位，其包括选自由以下组成的组的残基中的一个、两个、三个、四个、五个或六个：p55、h58、e122、g124、s125和/或k127(参考seqidno:2)。一方面，抗siglec抗体结合人siglec-7上的表位，其包括选自由以下组成的组的残基中的一个、两个、三个、四个、五个或六个：n82、p83、a84、r85、a86和/或v87(参考seqidno:1)。一方面，抗siglec抗体结合人siglec-7上的表位，其包括选自由以下组成的组的残基中的一个、两个、三个或四个：n81、d100、h102和/或t103(参考seqidno:1)。一方面，抗siglec抗体结合人siglec-7上的表位，其包括选自由以下组成的组的残基中的一个、两个、三个或四个：w88、e89、e90、r92(参考seqidno:1)。一旦获得了具有siglecs所需结合的抗原结合化合物，就可以评估其抑制siglec(例如，siglec-7和/或siglec-9)的能力。例如，如果抗siglec抗体降低或阻断由唾液酸配体诱导的siglec活化(例如，如存在于细胞上)，则它可以增加siglec-限制的淋巴细胞的细胞毒性。这可以通过典型的细胞毒性测定来评估，其实例如下所述。可以使用例如表达siglec-7或siglec-9的nk细胞和表达相应siglec的唾液酸配体的靶细胞，在标准的4小时体外细胞毒性测定中测试抗体减少siglec介导的信号传导的能力。此类nk细胞不能有效地杀死表达唾液酸配体的靶标，因为siglec-7或-9识别唾液酸配体，从而导致引发和传播阻止淋巴细胞介导的细胞溶解的抑制性信号传导。可以根据本文实例中的方法进行此类测定，例如参见实例8，使用原代nk细胞作为从供体中纯化的新鲜nk细胞，在使用之前在37℃下温育过夜。此类体外细胞毒性测定可以通过本领域众所周知的标准方法进行，如例如在coligan等人编辑的《免疫学实验指南(currentprotocolsinimmunology)》，格林出版协会和纽约州威利国际科学(1992，1993)中所述。在添加nk细胞之前，用51cr标记靶细胞，并且然后由于杀伤，将杀伤估计为与51cr从细胞向培养基的释放成比例。添加防止siglec-7和/或-9与唾液酸配体结合的抗体导致阻止抑制信号通过siglec的引发和传播。因此，添加此类试剂导致淋巴细胞介导的靶细胞杀伤的增加。因此，此步骤识别了通过例如阻断配体结合来防止siglec-7或-9诱导的负信号转导的试剂。在特定的51cr释放细胞毒性测定中，siglec-7或-9表达性nk效应细胞可以杀死唾液酸配体阴性靶细胞(例如，经唾液酸酶处理的细胞)，但是不能很好地杀死唾液酸配体表达性对照细胞。因此，由于通过特定的siglec唾液酸诱导的抑制信号传导，nk效应细胞杀死唾液酸配体阳性细胞的效率较低。在此类51cr释放细胞毒性测定中，在将nk细胞与阻断性抗siglec抗体进行预温育时，可以以抗体浓度依赖性方式更有效地杀死唾液酸配体表达性细胞。可以针对每个siglec，例如，siglec-7和siglec-9分别进行测定。抗体的抑制活性(即，提高细胞毒性的潜力)也可以以许多其它方式中的任一种来评估，例如，通过其对细胞内游离钙的作用，如所述，例如，在sivori等人，《实验医学杂志(j.exp.med.)》1997；186:1129-1136中，其公开内容通过引用并入本文，或通过对nk细胞细胞毒性活化的标志物，如脱粒标志物cd107或cd137表达的作用。nk、t或nkt细胞活性也可以使用任何基于细胞的细胞毒性测定进行评估，例如，测量任何其它参数以评估抗体刺激nk细胞杀死靶细胞，如p815、k562细胞或合适的肿瘤细胞的能力，如sivori等人，《实验医学杂志(j.exp.med.)》1997；186:1129-1136；vitale等人，《实验医学杂志(j.exp.med.)》1998；187:2065-2072；pessino等人《实验医学杂志(j.exp.med.)》1998；188:953-960；neri等人《临床和诊断实验室免疫学(clin.diag.lab.immun.)》2001；8:1131-1135；pende等人《实验医学杂志(j.exp.med.)》1999；190:1505-1516，所述文献中的每一个的全部内容通过引用并入本文。在一个实施例中，抗体制剂使siglec限制的淋巴细胞的细胞毒性增加至少10％，优选地使nk细胞毒性增加至少40％或50％，或更优选地使nk细胞毒性增加至少70％。细胞毒性淋巴细胞的活性也可以使用细胞因子释放测定来解决，其中将nk细胞与抗体一起温育，以刺激nk细胞的细胞因子产生(例如ifn-γ和tnf-α产生)。在示例性方案中，培养4天之后，通过细胞表面和胞浆内染色评估从pbmc产生的ifn-γ，并且通过流式细胞术分析。简而言之，以5μg/ml的终浓度添加布雷菲德菌素a(sigmaaldrich)，持续培养最后4小时。然后在通透化之前，将细胞与抗cd3和抗cd56mab一起温育(intrapreptm；beckmancoulter)，并且用pe-抗ifn-γ或pe-igg1(pharmingen)染色。使用elisa(gm-csf：duosetelisa，r&dsystems，minneapolis，mn，ifn-y：optelaset，pharmingen)，在上清液中测量从多克隆活化的nk细胞产生的gm-csf和ifn-y。抗体的片段和衍生物(其被本申请中使用的术语“抗体(antibody)”或“抗体(antibodies)”涵盖，除非另有说明或上下文明显矛盾)可以通过本领域已知的技术产生。“片段”包括完整抗体的一部分，通常是抗原结合位点或可变区。抗体片段的实例包含fab、fab'、fab'-sh、f(ab')2和fv片段；双抗体；任何抗体片段，其具有由一个不间断的连续氨基酸残基序列组成的一级结构的多肽(在本文中称为“单链抗体片段”或“单链多肽”)，包含但不限于(1)单链fv分子(2)仅含有一个轻链可变结构域的单链多肽，或含有轻链可变结构域的三个cdr，无相关的重链部分的其片段和(3)仅含有一个重链可变区的单链多肽，或含有重链可变区的三个cdr，无相关的轻链部分的其片段；和由抗体片段形成的多特异性(例如，双特异性)抗体。尤其包含纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dab”。在某些实施例中，可以在插入到表达载体中之前，修饰产生抗体的杂交瘤的dna，例如，通过用编码序列取代人重链和轻链恒定结构域代替同源非人类序列(例如，morrison等人，《美国国家科学院院刊(pnas)》pp.6851(1984))，或通过共价连接免疫球蛋白编码序列全部或部分非免疫球蛋白多肽的编码序列。以所述方式，制备具有原始抗体的结合特异性的“嵌合”或“杂合”抗体。通常，此类非免疫球蛋白多肽取代抗体的恒定结构域。任选地，抗体是人源化的。“人源化”形式的抗体是特异性嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(如fv、fab、fab'、f(ab')2或抗体的其它抗原结合子序列)，其含有衍生自鼠免疫球蛋白的最小序列。在大多数情况下，人源化抗体是人免疫球蛋白(受体抗体)，其中来自受体的互补决定区(cdr)的残基被来自原始抗体(供体抗体)的cdr的残基替换，同时维持原始抗体所需的特异性、亲和力和能力。在一些情况下，人免疫球蛋白的fv框架残基可以被对应的非人残基替换。更进一步，人源化抗体可以包括在受体抗体或导入的cdr或框架序列中未发现的残基。进行这些修饰以进一步改进和优化抗体性能。通常，人源化抗体将包括基本上全部至少一个、并且通常两个可变结构域，其中所有或基本上所有cdr区对应于原始抗体的那些，并且所有或基本上所有fr区是人免疫球蛋白共有序列中的那些。人源化抗体最佳地还将包括免疫球蛋白恒定区(fc)的至少一部分，通常是人免疫球蛋白恒定区的至少一部分。另外的细节参见jones等人，《自然(nature)》，321，第522页(1986)；reichmann等人，《自然(nature)》，332，第323页(1988)；presta，《结构生物学评论(curr.op.struct.biol.)》，2，第593页(1992)；verhoeyen等人，《科学(science)》，239，第1534页；以及美国专利第4,816,567号，所述专利的全部公开内容通过引用并入本文。)用于人源化抗体的方法是本领域熟知的。用于制备人源化抗体的人可变结构域，轻链和重链两者的选择对于降低抗原性非常重要。根据所谓的“最佳拟合”方法，针对已知人可变结构域序列的整个文库，筛选抗体的可变结构域的序列。然后接受最接近小鼠的人序列作为人源化抗体的人框架(fr)(sims等人，《免疫学杂志(j.immunol.)》第151期，第2296页(1993)；chothia和lesk，《分子生物学杂志(j.mol.)》第196期，1987，第901页)。另一种方法使用来自特定轻链或重链亚组的所有人抗体的共有序列的特定框架。相同的框架可以用于几种不同的人源化抗体(carter等人，《美国国家科学院院刊(pnas)》89，第4285页，(1992)；presta等人，《免疫学杂志(j.immunol.)》，151，第2623页(1993))。更重要的是，抗体被人源化，保留对siglec受体的高亲和力和其它有利的生物学特性。为了实现此目标，根据一种方法，通过使用亲代和人源化序列的三维模型分析亲代序列和各种概念性人源化产物的过程，制备人源化抗体。三维免疫球蛋白模型通常是可获得的，并且是本领域技术人员熟悉的。可获得计算机程序，其说明和显示所选候选免疫球蛋白序列的可能的三维结构。检查这些显示允许分析残基在候选免疫球蛋白序列的功能中的可能作用，即，分析影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。以此方式，可以从共有序列和输入序列中选择并组合fr残基，从而实现所需的抗体特性，如对一个或多个靶抗原的亲和力增加。通常，cdr残基直接且最实质地参与影响抗原结合。制备“人源化”单克隆抗体的另一种方法是使用转基因鼠(xenomouse)(abgenix，fremont，ca)作为用于免疫的小鼠。转基因鼠是一种小鼠宿主，根据其免疫球蛋白基因被功能性人免疫球蛋白基因替换。因此，由此小鼠或由此小鼠的b细胞制备的杂交瘤产生的抗体已经人源化。转基因鼠描述于美国专利第6,162,963号中，其通过引用以其整体并入本文。人抗体也可以根据各种其它技术产生，如通过使用已经被工程化以表达人抗体库的其它转基因动物用于免疫(jakobovitz等人，《自然(nature)》362(1993)255)，或通过使用噬菌体展示方法从抗体库选择。此类技术是本领域技术人员已知的，并且可以从本申请公开的单克隆抗体开始实施。在一个实施例中，抗siglec抗体可以制备成使得它们与人fcγ受体不具有实质性的特异性结合，例如，cd16a、cd16b、cd32a、cd32b和/或cd64中的任何一个或多个)。此类抗体可以包括已知缺乏或与fcγ受体具有低结合的各种重链的恒定区。替代性地，不包括(或包括部分)恒定区的抗体片段，如f(ab')2片段，可以用于避免fc受体结合。可以根据本领域已知的方法评估fc受体结合，包含例如在biacore测定中测试抗体与fc受体蛋白的结合。而且，通常可以使用任何抗体igg同种型，其中fc部分被修饰(例如，通过引入1个、2个、3个、4个、5个或更多个氨基酸取代)，以最小化或消除与fc受体的结合(参见，例如，wo03/101485，其公开内容通过引用并入本文)。如基于细胞的测定等用于评估fc受体结合的测定在本领域中是公知的，并且描述于，例如wo03/101485中。在一个实施例中，抗体可以在fc区中包括一个或多个特定突变，其导致与效应细胞具有最小相互作用的“fc沉默”抗体。沉默的效应功能可以通过抗体的fc区中的突变获得，并且已经在本领域中描述：n297a突变、lala突变(strohl,w.，2009，《生物技术当前述评(curr.opin.biotechnol.)》第20卷，第6期：685-691)；和d265a(baudino等人，2008，《免疫学杂志(j.immunol.)》181:6664-69)还参见heusser等人，wo2012/065950，其公开内容通过引用并入本文。在一个实施例中，抗体在铰链区中包括一个、两个、三个或更多个氨基酸取代。在一个实施例中，抗体是igg1或igg2，并且在残基233-236，任选地233-238(eu编号)处包括一个、两个或三个取代。在一个实施例中，抗体是igg4，并且在残基327、330和/或331(eu编号)处包括一个、两个或三个取代。沉默fcigg1抗体的实例是在igg1fc氨基酸序列中包括l234a和l235a突变的lala突变体。fc沉默突变的另一个实例是残基d265或d265和p329处的突变，例如在igg1抗体中用作dapa(d265a，p329a)突变(us6,737,056)。另一种沉默igg1抗体包括残基n297处的突变(例如，n297a、n297s突变)，其产生非糖基化/非糖基化抗体。其它沉默突变包含：在残基l234和g237(l234a/g237a)处的取代；在残基s228、l235和r409(s228p/l235e/r409k、t、m、l)处的取代；在残基h268、v309、a330和a331(h268q/v309l/a330s/a331s)处的取代；在残基c220、c226、c229和p238(c220s/c226s/c229s/p238s)处的取代；在残基c226、c229、e233、l234和l235(c226s/c229s/e233p/l234v/l235a处的取代；在残基k322、l235和l235(k322a/l234a/l235a)处的取代；在残基l234、l235和p331(l234f/l235e/p331s)处的取代；在残基234、235和297处的取代；在残基e318、k320和k322(l235e/e318a/k320a/k322a)处的取代；在残基(v234a、g237a、p238s)处的取代；在残基243和264处的取代；在残基297和299处的取代；使得由eu编号系统定义的残基233、234、235、237和238的取代包括选自paaap、paaas和saaas的序列(参见wo2011/066501)。在一个实施例中，抗体可以在fc区中包括一个或多个特定突变，其导致本公开的抗体的稳定性提高，例如，包括多个芳香族氨基酸残基和/或具有高疏水性。例如，此类抗体可以包括人igg1起源的fc结构域，包括一个或多个kabat残基234、235、237、330和/或331处的突变。此类fc结构域的一个实例包括kabat残基l234、l235和p331(例如，l234a/l235e/p331s或(l234f/l235e/p331s)处的取代。此类fc结构域的另一个实例包括kabat残基l234、l235、g237和p331(例如，l234a/l235e/g237a/p331s)处的取代。此类fc结构域的另一个实例包括kabat残基l234、l235、g237、a330和p331(例如，l234a/l235e/g237a/a330s/p331s)处的取代。在一个实施例中，抗体包括任选地人igg1同种型的fc结构域，其包括：l234x1取代、l235x2取代和p331x3取代，其中x1是除亮氨酸之外的任何氨基酸残基，x2是除亮氨酸之外的任何氨基酸残基，并且x3是除脯氨酸之外的任何氨基酸残基；任选地，其中x1是丙氨酸或苯丙氨酸或其保守取代；任选地，其中x2是谷氨酸或其保守取代；任选地，其中x3是丝氨酸或其保守取代。在另一个实施例中，抗体包括任选地人igg1同种型的fc结构域，其包括：l234x1取代、l235x2取代、g237x4取代和p331x4取代，其中x1是除亮氨酸之外的任何氨基酸残基，x2是除亮氨酸之外的任何氨基酸残基，x3是除甘氨酸之外的任何氨基酸残基，并且x4是除脯氨酸之外的任何氨基酸残基；任选地，其中x1是丙氨酸或苯丙氨酸或其保守取代；任选地，其中x2是谷氨酸或其保守取代；任选地，x3是丙氨酸或其保守取代；任选地，x4是丝氨酸或其保守取代。在另一个实施例中，抗体包括任选地人igg1同种型的fc结构域，其包括：l234x1取代、l235x2取代、g237x4取代、g330x4取代和p331x5取代，其中x1是除亮氨酸之外的任何氨基酸残基，x2是除亮氨酸之外的任何氨基酸残基，x3是除甘氨酸之外的任何氨基酸残基，x4是除丙氨酸之外的任何氨基酸残基，并且x5是除脯氨酸之外的任何氨基酸残基；任选地，其中x1是丙氨酸或苯丙氨酸或其保守取代；任选地，其中x2是谷氨酸或其保守取代；任选地，x3是丙氨酸或其保守取代；任选地，x4是丝氨酸或其保守取代；任选地，x5是丝氨酸或其保守取代。在此使用的简写符号中，格式为：野生型残基：多肽中的位置：突变残基，其中残基位置根据根据kabat的eu编号表示。在一个实施例中，抗体包括重链恒定区，所述重链恒定区包括下文的氨基酸序列，或与其至少90％、95％或99％相同但保留kabat位置234、235和331处的氨基酸残基的氨基酸序列(下划线)：astkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkscdkthtcppcpapeaeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk(seqidno:166)。在一个实施例中，抗体包括重链恒定区，所述重链恒定区包括下文的氨基酸序列，或与其至少90％、95％或99％相同但保留kabat位置234、235和331处的氨基酸残基的氨基酸序列(下划线)：astkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkscdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk(seqidno:167)。在一个实施例中，抗体包括重链恒定区，所述重链恒定区包括下文的氨基酸序列，或与其至少90％、95％或99％相同但保留kabat位置234、235、237、330和331处的氨基酸残基的氨基酸序列(下划线)：astkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkscdkthtcppcpapeaegapsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpssiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk(seqidno:168)。在一个实施例中，抗体包括重链恒定区，所述重链恒定区包括下文的氨基酸序列，或与其至少90％、95％或99％相同但保留kabat位置234、235、237和331处的氨基酸残基的序列(下划线)：astkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkscdkthtcppcpapeaegapsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk(seqidno:169)。fc沉默抗体导致无或低adcc活性，这意味着fc沉默抗体表现出低于50％特异性细胞裂解的adcc活性。优选地，抗体基本上缺乏adcc活性，例如，fc沉默抗体表现出低于5％或低于1％的adcc活性(特异性细胞裂解)。fc沉默抗体也可以导致在细胞(例如，nk细胞、t细胞、单核细胞、树突细胞、巨噬细胞)的表面处缺乏siglec-9和/或siglec-7的fcγr-介导的交联。在一个实施例中，抗体在选自由以下组成的组的残基中的任何一个、两个、三个、四个、五个或更多个处的重链恒定区中具有取代：220、226、229、233、234、235、236、237、238、243、264、268、297、298、299、309、310、318、320、322、327、330、331和409(重链恒定区中残基的编号根据根据kabat的eu编号)。在一个实施例中，抗体在残基234、235和322处包括取代。在一个实施例中，抗体在残基234、235和331处具有取代。在一个实施例中，抗体在残基234、235、237和331处具有取代。在一个实施例中，抗体在残基234、235、237、330和331处具有取代。在一个实施例中，fc结构域是由人igg1亚型构成的。氨基酸残基根据根据kabat的eu编号指示。抗体cdr序列抗体mab1、-2、-3、-4、-5、-6、-a、-b、-c、-d、-e和-f的重链和轻链可变区的氨基酸序列示出在表b中。在具体实施例中，提供了一种抗体，其结合与单克隆抗体mab1、-2、-3、-4、-5、-6、-a、-b、-c、-d、-e或-f基本上相同的表位或决定簇；任选地抗体包括抗体mab1、-2、-3、-4、-5、-6、-a、-b、-c、-d、-e或-f的高变区。在本文实施例的任一个中，抗体mab1、-2、-3、-4、-5、-6、-a、-b、-c、-d、-e或-f的特征可以在于氨基酸序列和/或编码其的核酸序列。在一个实施例中，单克隆抗体包括vh和/或vl，或mab1、-2、-3、-4、-5、-6、-a、-b、-c、-d、-e或-f的fab或f(ab')2部分。还提供了包括mab1的重链可变区的单克隆抗体。根据一个实施例，单克隆抗体包括mab1、-2、-3、-4、-5、-6、-a、-b、-c、-d、-e或-f的重链可变区的三个cdr；还提供了单克隆抗体，其进一步包括相应mab1、-2、-3、-4、-5、-6、-a、-b、-c、-d、-e或–f的可变轻链可变区或相应mab1、-2、-3、-4、-5、-6、-a、-b、-c、-d、-e或-f的轻链可变区的cdr中的一个、两个或三个。任选地，所述轻链或重链cdr中的任何一个或多个可以含有一个、两个、三个、四个或五个或更多个氨基酸修饰(例如，取代、插入或缺失)。任选地，提供了一种抗体，其中包括抗体mab1的部分或全部抗原结合区的轻链和/或重链可变区中的任一个与人igg型的免疫球蛋白恒定区，任选地人恒定区，任选地人igg1、igg2、igg3或igg4同种型融合，任选地进一步包括氨基酸取代，以减少效应子功能(结合人fcγ受体)。另一个方面，提供了一种抗体，其包括：mab1的hcdr1区，其包括如表a-1中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mab1的hcdr2区，其包括如表a-1中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mab1的hcdr3区，其包括如表a-1中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mab1的lcdr1区，其包括如表a-1中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mab1的lcdr2区，其包括如表a-1中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mab1的lcdr3区，其包括如表a-1中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被缺失或被不同的氨基酸取代。表a-1另一个方面，本发明提供了一种抗体，其中抗体包括：mab3的hcdr1区，其包括如表a-3中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mab3的hcdr2区，其包括如表a-3中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mab3的hcdr3区，其包括如表a-3中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mab3的lcdr1区，其包括如表a-3中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mab3的lcdr2区，其包括如表a-3中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mab3的lcdr3区，其包括如表a-3中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被缺失或被不同的氨基酸取代。表a-3另一个方面，本发明提供了一种抗体，其中抗体包括：mab4的hcdr1区，其包括如表a-4中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mab4的hcdr2区，其包括如表a-4中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mab4的hcdr3区，其包括如表a-4中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mab4的lcdr1区，其包括如表a-4中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mab4的lcdr2区，其包括如表a-4中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mab4的lcdr3区，其包括如表a-4中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被缺失或被不同的氨基酸取代。表a-4另一个方面，本发明提供了一种抗体，其中抗体包括：mab5的hcdr1区，其包括如表a-5中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mab5的hcdr2区，其包括如表a-5中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mab5的hcdr3区，其包括如表a-5中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mab5的lcdr1区，其包括如表a-5中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mab5的lcdr2区，其包括如表a-5中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mab5的lcdr3区，其包括如表a-5中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被缺失或被不同的氨基酸取代。表a-5另一个方面，本发明提供了一种抗体，其中抗体包括：maba的hcdr1区，其包括如表a-7中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；maba的hcdr2区，其包括如表a-7中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；maba的hcdr3区，其包括如表a-7中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；maba的lcdr1区，其包括如表a-7中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；maba的lcdr2区，其包括如表a-7中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；maba的lcdr3区，其包括如表a-7中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被缺失或被不同的氨基酸取代。表a-7另一个方面，本发明提供了一种抗体，其中抗体包括：mabb的hcdr1区，其包括如表a-8中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；任选地其中hcdr1包括氨基酸序列sywih(seqidno:198)；mabb的hcdr2区，其包括如表a-8中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；任选地其中hcdr2包括氨基酸序列einpsnghtnyaekfkt(seqidno:199)；mabb的hcdr3区，其包括如表a-8中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mabb的lcdr1区，其包括如表a-8中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；任选地其中hcdr1包括氨基酸序列qasqdinnyln(seqidno:200)；mabb的lcdr2区，其包括如表a-8中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mabb的lcdr3区，其包括如表a-8中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被缺失或被不同的氨基酸取代。表a-8另一个方面，本发明提供了一种抗体，其中抗体包括：mabc的hcdr1区，其包括如表a-9中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mabc的hcdr2区，其包括如表a-9中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mabc的hcdr3区，其包括如表a-9中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mabc的lcdr1区，其包括如表a-9中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mabc的lcdr2区，其包括如表a-9中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mabc的lcdr3区，其包括如表a-9中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被缺失或被不同的氨基酸取代。表a-9另一个方面，本发明提供了一种抗体，其中抗体包括：mabd的hcdr1区，其包括如表a-10中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mabd的hcdr2区，其包括如表a-10中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mabd的hcdr3区，其包括如表a-10中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mabd的lcdr1区，其包括如表a-10中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mabd的lcdr2区，其包括如表a-10中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mabd的lcdr3区，其包括如表a-10中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被缺失或被不同的氨基酸取代。表a-10另一个方面，本发明提供了一种抗体，其中抗体包括：mabe的hcdr1区，其包括如表a-11中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mabe的hcdr2区，其包括如表a-11中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mabe的hcdr3区，其包括如表a-11中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mabe的lcdr1区，其包括如表a-11中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mabe的lcdr2区，其包括如表a-11中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mabe的lcdr3区，其包括如表a-11中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被缺失或被不同的氨基酸取代。表a-11另一个方面，本发明提供了一种抗体，其中抗体包括：mabf的hcdr1区，其包括如表a-12中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mabf的hcdr2区，其包括如表a-12中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mabf的hcdr3区，其包括如表a-12中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mabf的lcdr1区，其包括如表a-12中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mabf的lcdr2区，其包括如表a-12中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；mabf的lcdr3区，其包括如表a-12中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可以被缺失或被不同的氨基酸取代。表a-12在本文实施例中的任一个的另一个方面，可以任选地将hcdr1、2、3和lcdr1、2、3序列中的任一个指定为kabat编号系统中的所有那些(或各自独立地)(如表a-1到a-12中针对每个cdr所示)，chotia编号系统中的那些(如表a-1到a-12中针对每个cdr所示)，imgt编号系统中的那些(如表a-1到a-12中针对每个cdr所示)或任何其它合适的编号系统。在本文实施例中的任一个的另一个方面，maba、mabb、mabc、mabd、mabe、mabf、mab1、mab2、mab3、mab4、mab5或mab6的重链和轻链的cdr1、2和3中的任一个的特征可以在于其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，和/或具有与特定cdr或对应seqidno中列出的cdr集共有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％或95％序列同一性的氨基酸序列。在本发明的抗体中的任一个中，例如，maba、mabb、mabc、mabd、mabe、mabf、mab1、mab2、mab3、mab4、mab5或mab6，指定的可变区和cdr序列可以包括序列修饰，例如，取代(1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个或更多个序列修饰)。在一个实施例中，重链和轻链的cdr1、2和/或3包括一个、两个、三个或更多个氨基酸取代，其中被取代的残基是人源序列中存在的残基。在一个实施例中，取代是保守修饰。保守序列修饰是指不会显著影响或改变含有氨基酸序列的抗体的结合特性的氨基酸修饰。此类保守修饰包含氨基酸取代、添加和缺失。可以通过本领域已知的标准技术，将修饰引入到本发明的抗体中，如定点诱变和pcr介导的诱变。保守氨基酸取代通常是其中氨基酸残基被具有具有类似的理化性质的侧链的氨基酸残基替换的那些氨基酸取代。指定的可变区和cdr序列可以包括一个、两个、三个、四个或更多个氨基酸插入、缺失或取代。在进行取代的情况下，优选的取代将是保守修饰。具有类似侧链的氨基酸残基家族已经在本领域中定义。这些家族包含具有碱性侧链的氨基酸(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)，具有酸性侧链的氨基酸(例如天冬氨酸、谷氨酸)，具有不带电荷的极性侧链的氨基酸(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)，具有非极性侧链的氨基酸(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸)，具有β支链侧链的氨基酸(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和具有芳香族侧链的氨基酸(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。因此，本发明的抗体的cdr区内的一个或多个氨基酸残基可以被来自相同侧链家族的其它氨基酸残基替换，并且可以使用本文所述的测定，测试改变的抗体的保留功能(即，本文列出的性质)。根据imgt、kabat和chothia定义系统，cdr的序列总结在表a-1到a-12中。下表b列出了根据本发明的抗体的可变区的序列。在本文的任何实施例中，可以指定或编号vl或vh序列，以进一步包括或缺乏信号肽或其任何部分。在一个实施例中，本发明的抗体是保留其结合和/或功能特性的抗体片段。表bmaba的人源化变体的实例包含具有重链和轻链可变区的以下组合的抗体(如表c和实例2中所示)：mabah0l0、mabah0l1、mabah0l2、mabah1l0、mabah1l1、mabah1l2、mabah2l0、mabah2l1、mabah2l2、mabah3l0、mabah3l1或mabah3l2。在任何方面，抗体或抗原结合结构域可以包括vh和vl，其中vh和vl各自包括与以下抗体中的任一个的相应vh和vl至少80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列：mabah0l0、mabah0l1、mabah0l2、mabah1l0、mabah1l1、mabah1l2、mabah2l0、mabah2l1、mabah2l2、mabah3l0、mabah3l1或mabah3l2。mabb的人源化变体的实例包含具有重链和轻链可变区的以下组合的抗体(如表c和实例2中所示)：mabbh0l0、mabbh0l1、mabbh0l2、mabbh1l0、mabbh1l1、mabbh1l2、mabbh2l0、mabbh2l1、mabbh2l2、mabbh3l0、mabbh3l1、mabbh3l2、mabbh4l0、mabbh4l1、mabbh4l2、mabbh5l0、mabbh5l1或mabbh5l2。在任何方面，抗体或抗原结合结构域可以包括vh和vl，其中vh和vl各自包括与以下抗体中的任一个的相应vh和vl至少80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列：mabbh0l0、mabbh0l1、mabbh0l2、mabbh1l0、mabbh1l1、mabbh1l2、mabbh2l0、mabbh2l1、mabbh2l2、mabbh3l0、mabbh3l1、mabbh3l2、mabbh4l0、mabbh4l1、mabbh4l2、mabbh5l0、mabbh5l1或mabbh5l2。mabc的人源化变体的实例包含具有重链和轻链可变区的以下组合的抗体(如表c和实例2中所示)：mabch0l0、mabch0l1、mabch1l0、mabch1l1、mabch2l0、mabch2l1、mabch3l0或mabch3l1。在任何方面，抗体或抗原结合结构域可以包括vh和vl，其中vh和vl各自包括与以下抗体中的任一个的相应vh和vl至少80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列：mabch0l0、mabch0l1、mabch1l0、mabch1l1、mabch2l0、mabch2l1、mabch3l0或mabch3l1。mabd的人源化变体的实例包含具有重链和轻链可变区的以下组合的抗体(如表c和实例2中所示)：mabdh0l0、mabdh0l1、mabdh0l2、mabdh1l0、mabdh1l1、mabdh1l2、mabdh2l0、mabdh2l1或mabdh2l2。在任何方面，抗体或抗原结合结构域可以包括vh和vl，其中vh和vl各自包括与以下抗体中的任一个的相应vh和vl至少80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列：mabdh0l0、mabdh0l1、mabdh0l2、mabdh1l0、mabdh1l1、mabdh1l2、mabdh2l0、mabdh2l1或mabdh2l2。人源化maba、mabb和mabd的重链和轻链可变区的氨基酸序列列出于下文表c和实例2中。表c对于相应的抗体，maba、mabb、mabc或mabd抗体的重链可变区可以包括：人重链fr1框架区；hcdr1区，其包括如表a中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；人重链fr2框架区；hcdr2区，其包括如表a中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；人重链fr3框架区；和hcdr3区，其包括如表a中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代。任选地，可变区进一步包括人重链fr4框架区。对于相应的抗体，maba、mabb、mabc或mabd抗体的轻链可变区可以包括：人轻链fr1框架区；lcdr1区，其包括如表a中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；人轻链fr2框架区；lcdr2区，其包括如表a中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸取代；人轻链fr3框架区；和lcdr3区，其包括如表a中列出的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，其中这些氨基酸中的一个或多个可以被不同的氨基酸缺失或取代。任选地，可变区进一步包括人轻链fr4框架区。vh和vl组合的实例包含：vh和vl，所述vh包括seqidno:15的vh的cdr1、2和3，以及人ighv1-69或ighv1-46基因区段的fr1、2和3，所述vl包括seqidno:16的vl的cdr1、2和3，以及人igkv1-33基因区段的fr1、2和3。在一个实施例中，vh在seqidno15的残基26、27、74和/或98的1、2、3或4处的框架中包括取代。在一个实施例中，vl在seqidno16的残基44和/或71的1、2、3或4处的框架中包括取代。vh和vl组合的另一个实例包含：vh和vl，所述vh包括seqidno:17的vh的cdr1、2和3，以及人ighv1-46和/或ighv1-69基因区段的fr1、2和3，所述vl包括seqidno:18的vl的cdr1、2和3，以及人igkv1-33基因区段的fr1、2和3。vh和vl组合的另一个实例包含：vh和vl，所述vh包括seqidno:21的vh的cdr1、2和3，以及人ighv7-4-1*02基因区段的fr1、2和3(任选地与人ighj6*01基因区段的fr4一起)，所述vl包括seqidno:22的vl的cdr1、2和3，以及人igkv1-39基因区段(例如，igkv1-39*01)的fr1、2和3。在一个实施例中，根据kabat编号确定cdr。在一个实施例中，vh在seqidno:17的残基26、27、30和/或74的1、2、3或4处的框架中包括取代。在一个实施例中，vh在seqidno:17的残基34、61和/或66的1、2或3处的cdr中包括取代vh取代，例如，m34i取代、n61a取代和/或t66g替代。另一个方面，人源化maba抗体的vh和vl组合的实例包含：(a)vh和vl，所述vh包括mabah0、h1、h2或h3可变结构域的氨基酸序列(或与其至少70％、80％、90％、95％或98％相同)的氨基酸序列，所述vl包括mabal0可变结构域的氨基酸序列(或与其至少70％、80％、90％、95％或98％相同)的氨基酸序列；(b)vh和vl，所述vh包括mabah0、h1、h2或h3可变结构域的氨基酸序列(或与其至少70％、80％、90％、95％或98％相同)的氨基酸序列，所述vl包括mabal1可变结构域的氨基酸序列(或与其至少70％、80％、90％、95％或98％相同)的氨基酸序列；或(c)vh和vl，所述vh包括mabah0、h1、h2或h3可变结构域的氨基酸序列(或与其至少70％、80％、90％、95％或98％相同)的氨基酸序列，所述vl包括mabal2可变结构域的氨基酸序列(或与其至少70％、80％、90％、95％或98％相同)的氨基酸序列。另一个方面，人源化mabb抗体的vh和vl组合的实例包含：(a)vh和vl，所述vh包括mabbh0、h1、h2、h3、h4或h5可变结构域的氨基酸序列(或与其至少70％、80％、90％、95％或98％相同)的氨基酸序列，所述vl包括mabbl0可变结构域的氨基酸序列(或与其至少70％、80％、90％、95％或98％相同)的氨基酸序列；(b)vh和vl，所述vh包括mabbh0、h1、h2、h3、h4或h5可变结构域的氨基酸序列(或与其至少70％、80％、90％、95％或98％相同)的氨基酸，所述vl包括mabbl1可变结构域的氨基酸序列(或与其至少70％、80％、90％、95％或98％相同)的氨基酸序列；或(c)vh和vl，所述vh包括mabbh0、h1、h2、h3、h4或h5可变结构域的氨基酸序列(或与其至少70％、80％、90％、95％或98％相同)的氨基酸序列，所述vl包括mabbl2可变结构域的氨基酸序列(或与其至少70％、80％、90％、95％或98％相同)的氨基酸序列。另一个方面，人源化mabc抗体的vh和vl组合的实例包含：(a)vh和vl，所述vh包括mabch0、h1、h2或h3可变结构域的氨基酸序列(或与其至少70％、80％、90％、95％或98％相同)的氨基酸序列，所述vl包括mabcl0可变结构域的氨基酸序列(或与其至少70％、80％、90％、95％或98％相同)的氨基酸序列；或(b)vh和vl，所述vh包括mabch0、h1、h2或h3可变结构域的氨基酸序列(或与其至少70％、80％、90％、95％或98％相同)的氨基酸，所述vl包括mabcl1可变结构域的氨基酸序列(或与其至少70％、80％、90％、95％或98％相同)的氨基酸序列。另一个方面，人源化mabd抗体的vh和vl组合的实例包含：(a)vh和vl，所述vh包括mabdh0、h1或h2可变结构域的氨基酸序列(或与其至少70％、80％、90％、95％或98％相同)的氨基酸序列，所述vl包括mabdl0可变结构域的氨基酸序列(或与其至少70％、80％、90％、95％或98％相同)的氨基酸序列；(b)vh和vl，所述vh包括mabdh0、h1或h2可变结构域的氨基酸序列(或与其至少70％、80％、90％、95％或98％相同)的氨基酸序列，所述vl包括mabdl1可变结构域的氨基酸序列(或与其至少70％、80％、90％、95％或98％相同)的氨基酸序列；或(c)vh和vl，所述vh包括mabdh0、h1或h2可变结构域的氨基酸序列(或与其至少70％、80％、90％、95％或98％相同)的氨基酸，所述vl包括mabdl2可变结构域的氨基酸序列(或与其至少70％、80％、90％、95％或98％相同)的氨基酸序列。抗体调配物抗siglec抗体可以掺入药物调配物中，所述药物调配物包括1mg/ml到500mg/ml的浓度，其中所述调配物的ph为2.0到10.0。调配物可以进一步包括缓冲系统、一种或多种防腐剂、一种或多种张力剂、一种或多种螯合剂、稳定剂和表面活性剂。在一个实施例中，药物调配物是含水调配物，即包括水的调配物。此类调配物通常是溶液或悬浮液。在另外的实施例中，药物调配物是水溶液。术语“含水调配物”定义为包括至少50％w/w水的调配物。同样，术语“水溶液”定义为包括至少50％w/w水的溶液，并且术语“水性悬浮液”定义为包括至少50％w/w水的悬浮液。在另一个实施例中，药物调配物是冻干调配物，医师或患者在使用之前加入溶剂和/或稀释剂。在另一个实施例中，药物调配物是干燥调配物(例如，冷冻干燥或喷雾干燥)，无需任何预先溶解即可使用。另一方面，药物调配物包括此类抗体的水溶液和缓冲液，其中抗体以1mg/ml或更高的浓度存在，并且其中所述调配物的ph为约2.0到约10.0。在另一个实施例中，调配物的ph处于选自由以下组成的列表的范围内：约2.0到约10.0、约3.0到约9.0、约4.0到约8.5、约5.0到约8.0、和约5.5到约7.5。在另外的实施例中，缓冲剂选自由以下组成的组：乙酸钠、碳酸钠、柠檬酸盐、甘氨酰甘氨酸、组氨酸、甘氨酸、赖氨酸、精氨酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸钠和三(羟甲基)-氨基甲烷、二羟乙甘氨酸、三甲基甘氨酸、羟基丁二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、酒石酸、天冬氨酸或其混合物。这些特定缓冲液中的每一种构成本发明的替代性实施例。在另外的实施例中，调配物进一步包括药学上可接受的防腐剂。在另外的实施例中，调配物进一步包括等渗剂。在另外的实施例中，调配物还包括螯合剂。在本发明的另外的实施例中，调配物进一步包括稳定剂。在另外的实施例中，调配物进一步包括表面活性剂。为方便起见，参考《雷明顿：药学技术与实践(remington:thescienceandpracticeofpharmacy)》，第19版，1995。本发明的肽药物调配物中可能存在其它成分。此类附加成分可以包含润湿剂、乳化剂、抗氧化剂、填充剂、张力调节剂、螯合剂、金属离子、油质媒剂、蛋白质(例如人血清白蛋白、明胶或蛋白质)和两性离子(例如氨基酸，如甜菜碱、牛磺酸、精氨酸、甘氨酸、赖氨酸和组氨酸)。当然，此类额外的成分不应对本发明的药物调配物的总体稳定性产生不利影响。含有根据本发明的抗体的药物组合物可以在几个部位施用于需要此类治疗的患者，例如，在局部部位，例如皮肤和粘膜部位，在旁路吸收的部位，例如，在动脉中、静脉中、心脏和涉及吸收的部位施用，例如，在皮肤、皮下、肌肉或腹部施用。根据本发明的药物组合物的施用可以通过几种施用途径，例如皮下、肌肉内、腹膜内、静脉内、舌、舌下、口腔、口中、口服、胃和肠、鼻，肺，例如，通过细支气管和肺泡或其组合，表皮、真皮、透皮、阴道、直肠、眼，例如通过结膜、尿道和肠胃外给需要此类治疗的患者。也可以通过检查其它已经开发的治疗性单克隆抗体的经验确定合适的抗体调配物。已经证明几种单克隆抗体在临床情况下是有效的，如美罗华(利妥昔单抗)、赫赛汀(曲妥珠单抗)、索雷尔(奥马珠单抗)、百克沙(托西莫单抗)、坎帕斯(阿仑单抗)、泽娃灵、oncolym和类似的调配物可以与本发明的抗体一起使用。例如，可以在100mg(10ml)或500mg(50ml)一次性小瓶中以10mg/ml的浓度供应单克隆抗体，调配用于在9.0mg/ml氯化钠、7.35mg/ml柠檬酸钠二水合物、0.7mg/ml聚山梨醇酯80和无菌注射用水中iv施用。将ph调节到6.5。在另一个实施例中，以包括约20mm柠檬酸钠、约150mmnacl的调配物供应抗体，ph为约6.0。恶性肿瘤的诊断和治疗还提供了使用如本文所述的抗siglec抗体治疗个体，特别是人患者的方法。在一个实施例中，本发明提供了如本文所述的抗体在制备用于施用于人类患者的药物组合物中的用途。通常，患者患有癌症或传染病，例如，细菌性疾病或病毒性疾病或具有其风险。例如，一方面，本发明提供了一种在有需要的患者中增强siglec-7和/或-9限制性免疫细胞，例如淋巴细胞的活性的方法，所述方法包括向所述患者施用中和性抗siglec7和/或-9抗体的步骤。抗体可以是例如人或人源化的抗siglec-7和/或-9抗体，所述抗体减少或阻止唾液酸介导的siglec-7和/或-9受体的活化。在一个实施例中，方法涉及增加患有其中增加的淋巴细胞(例如nk和/或cd8 t细胞)活性是有益的疾病的患者中此类淋巴细胞的活性，其涉及、影响或由易由nk或cd8 t细胞裂解的细胞引起，或由nk或cd8 t细胞活性不足引起或表征，如癌症或传染病。例如，一方面，本发明提供了一种增强有需要的患者中siglec-7和/或-9限制的免疫细胞，例如nk细胞(例如cd56明亮细胞)、t细胞、单核细胞、树突细胞、巨噬细胞(例如免疫抑制或m2巨噬细胞)的活性(例如细胞活化、抗肿瘤免疫或活性、细胞因子产生、增殖)的方法，其包括向所述患者施用本公开的中和性抗siglec7和/或-9抗体的步骤。在一个实施例中，本公开的抗体用于治疗特征在于表达st3gal6和/或st3gal1酶(或例如高水平的st3gal6和/或st3gal1酶活性)，任选地过表达st3gal6酶(与在健康个体中的例如健康组织中的表达相比)的肿瘤。更具体地说，本文的方法和组合物用于治疗多种癌症和其它增殖性疾病。因为这些方法通过阻断淋巴细胞上的抑制性受体来增强免疫反应，因此适用于非常广泛的癌症。在一个实施例中，用本公开的抗siglec抗体治疗的人患者患有肝癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌(例如hnscc)、乳腺癌、肺癌、非小细胞肺癌(nsclc)、去势抵抗性前列腺癌(crpc)、黑色素瘤、子宫癌、结肠癌、直肠癌、肛门癌、胃癌、睾丸癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、非霍奇金氏淋巴瘤、食管癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、儿童实体瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾癌或输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统肿瘤(cns)、原发性cns淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊髓轴肿瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、卡波西氏肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、环境诱发的癌症，包含由石棉诱发的那些癌症，血液学恶性肿瘤，包含例如多发性骨髓瘤、b细胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤/原发性纵隔b细胞淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、急性髓性淋巴瘤、慢性髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病、滤泡性淋巴瘤、弥漫性大b细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、前体b淋巴母细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、急性淋巴细胞白血病、蕈样真菌病、间变性大细胞淋巴瘤、t细胞淋巴瘤和前体t淋巴母细胞淋巴瘤、以及所述癌症的任何组合。本发明还适用于转移性癌症的治疗。可以在治疗之前、期间或之后，测试或选择患者的上述临床属性中的一种或多种。基于抗siglec抗体的治疗也可以用于治疗或预防传染病，优选地包含由病毒、细菌、原生动物、霉菌或真菌感染引起的任何感染。此类病毒感染生物包含但不限于甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、流感、水痘、腺病毒、单纯疱疹i型(hsv-1)、单纯疱疹2型(hsv-2)、牛瘟、鼻病毒、回声病毒、轮状病毒、呼吸道合胞病毒、乳头瘤病毒、乳头瘤病毒、巨细胞病毒、棘皮病毒、虫媒病毒、亨达病毒、柯萨奇病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、风疹病毒、脊髓灰质炎病毒和人类i型或2型免疫缺陷病毒(hiv-1、hiv-2)。细菌构成另一类优选的传染性生物，包含但不限于以下：葡萄球菌；链球菌，包含化脓性链球菌；肠球菌；芽孢杆菌，包含炭疽芽孢杆菌和乳杆菌；李斯特菌；白喉杆菌；加氏菌，包含阴道加氏菌；诺卡氏菌；链霉菌；寻常热放线菌；treponerna；弯曲杆菌，假单胞菌，包含铜绿假单胞菌；军团菌；奈瑟菌，包含淋病奈瑟菌和脑膜炎奈瑟菌；黄杆菌，包含f.脑膜炎和f.odoraturn；布鲁切拉；博德特氏菌，包含百日咳杆菌和支气管败血杆菌；大肠杆菌，包含大肠杆菌，克雷伯菌；肠杆菌，沙雷氏菌，包含s.marcescens和s.liquefaciens；爱德华氏菌；变形杆菌，包含奇异假单胞菌和寻常假单胞菌；链球菌；立克次体，包含r.fickettsfi，衣原体，包含c.psittaci和c.trachornatis；分枝杆菌，包含结核分枝杆菌，胞内分枝杆菌，folluiturn分枝杆菌，拉普拉分枝杆菌，鸟分枝杆菌，牛分枝杆菌，非洲分枝杆菌，堪萨斯分枝杆菌，胞内分枝杆菌和麻风分枝杆菌；和诺卡氏菌。原生动物可以包含但不限于利什曼原虫、科奇齐亚虫和锥虫。寄生虫包含但不限于衣原体和立克次体。抗体组合物可以用于治疗个体，无论由个体表达的等位基因中siglec-9中的位置100(参考seqidno:2)或siglec-7中的位置104(参考seqidno:1)处存在的残基如何。在位置100处带有赖氨酸的siglec-9(例如seqidno:2)代表约49％的群体，而在位置100处带有谷氨酸的siglec-9(例如seqidno:160)代表约36％的群体。在一个实施例中，抗体组合物用于治疗在siglec-9中的位置100处具有赖氨酸的个体(参考seqidno:2)和在siglec-9中的位置100处具有谷氨酸的个体。在一个实施例中，相同的施用方案用于治疗其细胞(例如nk细胞、嗜中性粒细胞等)在siglec-9中的位置100处表达赖氨酸的个体(参考seqidno:2)和其细胞在siglec-9中的位置100处表达谷氨酸的个体。在一个实施例中，施用方案包括相同的施用方式、相同的剂量和相同的施用频率，而与个体中表达的mica的特定等位基因无关。抗体组合物可以与一种或多种其它治疗剂一起用于单一疗法或联合治疗中，包含通常用于施用抗体的特定治疗目的的试剂。另外的治疗剂通常以针对所治疗的特定疾病或病症的单一疗法中通常用于所述试剂的量和治疗方案施用。此类治疗剂包含但不限于抗癌剂和化学治疗剂。在一个实施例中，抗siglec-9和/或-7中和缺乏与人cd16的结合，又增强cd16表达性效应细胞(例如，nk细胞或效应t细胞)的活性的抗体。因此，在一个实施例中，第二或附加第二治疗剂是抗体或能够诱导adcc朝其结合的细胞的其它含fc结构域的蛋白，例如，通过由nk细胞表达的cd16。通常，此类抗体或其它蛋白将包括结合目标抗原的结构域，例如肿瘤细胞上存在的抗原(肿瘤抗原)，以及fc结构域或其部分，并且将通过抗原结合结构域显示与抗原的结合，并且通过fc结构域显示与fcγ受体(例如，cd16)的结合。在一个实施例中，其adcc活性将至少部分地由cd16介导。在一个实施例中，另外的治疗剂是具有天然或经过修饰的人fc结构域的抗体，例如来自人igg1或igg3抗体的fc结构域。术语“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”或“adcc”是本领域熟知的术语，并且是指细胞介导的反应，其中表达fc受体(fcr)的非特异性细胞毒性细胞识别靶细胞上结合的抗体，并且随后引起靶细胞的裂解。介导adcc的非特异性细胞毒性细胞包含自然杀伤(nk)细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞。术语“adcc诱导抗体”是指如通过本领域技术人员已知的一种或多种测定法测量的，证明adcc的抗体。此类活性的典型特征在于fc区与各种fcr的结合。不受任何特定机制的限制，本领域技术人员将认识到抗体证明adcc的能力可以是，例如，通过其亚类(如igg1或igg3)、通过引入到fc结构域中的突变、或通过修饰抗体的fc结构域中的碳水化合物模式。诱导adcc的抗体的实例包含利妥昔单抗(用于淋巴瘤、cll的治疗)、曲妥单抗(用于乳腺癌的治疗)、阿仑单抗(用于慢性淋巴细胞性白血病的治疗)和西妥昔单抗(用于结肠直肠癌、头颈部鳞状细胞癌的治疗)。adcc增强抗体的实例包含但不限于：ga-101(低岩藻糖基化抗cd20)、玛格图单抗(margetuximab)(fc增强抗her2)、美泊利单抗、medi-551(fc工程化抗cd19)、奥比努单抗(obinutuzumab)(糖工程化/低岩藻糖基化抗cd20)、奥卡拉单抗(ocaratuzumab)(fc工程化抗cd20)、5574/mor208(fc工程化抗cd19)。在一个实施例中，抗siglec-9和/或-7中和性抗体增强了中和人pd-1的抑制活性，例如抑制pd-1与pd-l1之间的相互作用的试剂的功效，特别是在对用中和人pd-1的抑制活性的试剂进行的治疗反应不佳(或不敏感)的个体中。抗siglec-9和/或-7中和性抗体可以用于增强pd-1表达性效应细胞(例如nk或效应t细胞，例如表达siglec-9的nk细胞)的活性。因此，在一个实施例中，第二或附加第二治疗剂是中和人pd-1的抑制活性的抗体或其它试剂。程序性死亡1(pd-1)(也称为“程序性细胞死亡1”)是cd28受体家族的抑制成员。完整的人pd-1序列可以在基因库登录号u64863下找到。抑制或中和pd-1的抑制活性可以涉及使用阻止pd-l1诱导的pd-1信号传导的多肽试剂(例如，抗体、融合于fc结构域、免疫粘附素等的多肽)。目前，至少有六种试剂已在市场上出售或在临床评估中阻断了pd-1/pd-l1途径。一种试剂是bms-936558(纳武单抗/ono-4538，bristol-myerssquibb；以前的mdx-1106)。纳武单抗(商品名称)是fda批准的完全人igg4抗pd-l1mab，其抑制pd-l1配体与pd-1和cd80两者的结合，并且在wo2006/121168中被描述为抗体5c4，其公开内容通过引用并入本文。对于黑素瘤患者，在3mg/kg的剂量下观察到最显著的or，而对于其它癌症类型，其为10mg/kg。纳武单抗通常每3周给药10mg/kg，直到癌症进展。术语“降低人pd-1的抑制活性”、“中和pd-1”或“中和人pd-1的抑制活性”是指由于pd-1与其结合配偶体中的一种或多种结合配偶体，如pd-l1或pd-l2的相互作用，pd-1的信号转导能力受到抑制的过程。中和pd-1的抑制活性的试剂减少、阻断、抑制、消除或干扰由pd-1与其结合配偶体中的一种或多种结合配偶体，如pd-l1、pd-l2的相互作用引起的信号转导。因此，此类试剂可以减少由或通过t淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白介导的负共刺激信号，从而增强t细胞效应子功能，如增殖、细胞因子产生和/或细胞毒性。mk-3475(来自merck的人igg4抗pd1mab)，也被称为拉波力单抗(lambrolizumab)或派姆单抗(商品名称)已经被fda批准用于治疗黑素瘤，并且正在其它癌症中测试。派姆单抗以每2周或3周2mg/kg或10mg/kg测试，直到疾病进展。编码人源化抗体h409的重链和轻链的可变区的dna构建体。所有都已经保存在美国典型培养物保藏中心专利保藏处(10801universityblvd.，manassas，va)。含有编码h409a-1的重链的dna的质粒于2008年6月9日保存，并且识别为081469_spd-h，并且含有编码h409a1的轻链的dna的质粒于2008年6月9日保存，并且识别为0801470_spd-l-l1。mk-3475，也称为merck3745或sch-900475，也在wo2009/114335中描述。mpdl3280a/rg7446(来自roche/genentech的抗pd-l1)是一种含有工程化的fc结构域的人抗pd-l1mab，其通过最小化fcγr结合和随之发生的抗体依赖性细胞的细胞毒性(adcc)，设计成优化功效和安全性。每3周施用≤1mg/kg、10mg/kg、15mg/kg和25mg/kgmpdl3280a的剂量，持续长达1年。在3期试验中，在nsclc中，每三周静脉内输注施用1200mgmpdl3280a。amp-224(amplimmune和gsk)是包括融入fc结构域的pd-l2细胞外结构域的免疫粘附素。中和pd-1的试剂的其它实例可以包含结合pd-l2(抗pd-l2抗体)和阻断pd-1与pd-l2之间的相互作用的抗体。匹地立单抗(pidlizumab)(ct-011；curetech)(来自curetech/teva的人源化igg1抗pd1mab)、匹地立单抗(ct-011；curetech)(参见例如wo2009/101611)是另一个实例；在三十名患有利妥昔单抗敏感性复发fl的患者中测试试剂，每4周用3mg/kg静脉ct-011与每周375mg/m2剂量的利妥昔单抗组合进行4次输注治疗，持续4周，在首次输注ct-011之后2周开始。进一步已知的pd-1抗体和其它pd-1抑制剂包含amp-224(授权gsk的b7-dc/igg1融合蛋白)、wo2012/145493中所述的amp-514、wo2011/066389和us2013/034559中所述的抗体medi-4736(由astrazeneca/medimmune开发的抗pd-l1)、wo2010/077634中所述的抗体yw243.55.s70(抗pd-l1)、mdx-1105，也称为bms-936559，是wo2007/005874中所述由bristol-myerssquibb开发的抗pd-l1抗体、以及wo2006/121168、wo2009/014708、wo2009/114335和wo2013/019906中所述的抗体和抑制剂，其公开内容通过引用在此并入。抗pd1抗体的另外实例公开于wo2015/085847(上海恒瑞药业有限公司)中，例如分别具有seqidno:6，seqidno:7和/或seqidno:8的轻链可变结构域cdr1、2和3的抗体，和分别具有seqidno:3，seqidno:4或seqidno:5的重链可变结构域cdr1、2和3的抗体，其中seqidno参考是根据wo2015/085847编号的，其公开内容通过引用并入本文。也可以使用与任何这些抗体竞争结合pd-1或pd-l1的抗体。示例性的抗pd-1抗体是派姆单抗(参见，例如wo2009/114335，其公开内容通过引用并入本文)。抗pd-1抗体可以是wo2008/156712中的抗体h409al1，其包括由沉积在atcc作为081469_spd-h的dna编码的重链可变区和由沉积在atcc作为0801470_spd-l-i1的dna编码的轻链可变区。在其它实施例中，抗体包括派姆单抗的重链和轻链cdr或可变区。因此，在一个实施例中，抗体包括由沉积在atcc作为081469_spd-h的dna编码的派姆单抗的vh的cdr1、cdr2和cdr3结构域，和由沉积在atcc作为0801470_spd-l-i1的dna编码的派姆单抗的vl的cdr1、cdr2和cdr3结构域。在一些实施例中，pd-1中和剂是抑制pd-l1与pd-1的结合的抗-pd-l1mab。在一些实施例中，pd-1中和剂是抑制pd-1与pd-l1的结合的抗-pd1mab。在一些实施例中，pd-1中和剂是免疫粘附素(例如，包括与恒定区(例如，免疫球蛋白序列的fc区)融合的pd-l1或pd-l2的细胞外或pd-1结合部分的免疫粘附素)。在治疗方法中，抗siglec抗体和第二治疗剂可以分开、一起或依次施用、或以混合物形式施用。在一些实施例中，在施用第二治疗剂之前施用抗原结合化合物。例如，可以在施用第二治疗剂之前约0天到30天施用抗siglec抗体。在一些实施例中，在施用第二治疗剂之前约30分钟到约2周、约30分钟到约1周、约1小时到约2小时、约2小时到约4小时、约4小时到约6小时、约6小时到约8小时、约8小时到1天、或约1天到5天，施用抗siglec抗体。在一些实施例中，抗siglec抗体与治疗剂的施用同时施用。在一些实施例中，在施用第二治疗剂之后，施用抗siglec抗体。例如，可以在施用第二治疗剂之后约0天到30天施用抗siglec抗体。在一些实施例中，在施用第二治疗剂之后约30分钟到约2周、约30分钟到约1周、约1小时到约2小时、约2小时到约4小时、约4小时到约6小时、约6小时到约8小时、约8小时到1天、或约1天到5天，施用抗siglec抗体。在其它方面，提供了用于识别siglec-7 和/或siglec-9 nk细胞和/或t细胞，例如cd8t细胞、cd56明亮nk细胞、cd56暗淡nk细胞的方法。评估nk细胞和/或t细胞上siglec-7和/或siglec-9的共表达可以用于诊断或预后方法中。例如，可以从个体(例如，从血液样品，从癌症患者获得的癌症或癌症邻近组织)获得生物学样品，并且分析siglec-7和/或siglec-9 nk和/或t细胞的存在。siglec-9在此类细胞上的表达可以例如用于识别具有nk和/或t细胞的个体，例如被siglec-9多肽抑制的肿瘤浸润性nk和/或t细胞。siglec-7和siglec-9两者在此类细胞上的表达可以例如用于识别具有nk和/或t细胞的个体，例如被siglec-7和siglec-9多肽两者抑制的肿瘤浸润性nk和/或t细胞。方法例如可以用作对用中和siglec-7和/或siglec-9的试剂进行的治疗的反应的预后。siglec-9(和任选地另外的siglec-7)在此类细胞上的表达可以指示适合用本公开的抗体治疗的个体。在某些任选的方面，可以通过评估肿瘤样品(例如，肿瘤组织和/或肿瘤邻近组织)中siglec-7和/或siglec-9的天然配体的存在，来识别用抗siglec-7和/或-9抗体治疗的患者。在本文的治疗用途或癌症治疗或预防方法中的任一个的一个实施例中，治疗或预防个体的癌症包括：a)确定患有癌症的个体内的恶性细胞(例如肿瘤细胞)是否表达siglec-7的配体和/或siglec-9的配体，以及b)在确定siglec-7的配体和/或siglec-9的配体由恶性细胞(例如，肿瘤细胞)(例如在其表面上)显著表达时，向个体施用相应的抗siglec7和或-9抗体，例如，根据本公开的任何方面的抗体。在一个实施例中，确定生物学样品(例如，包括肿瘤细胞、肿瘤组织和/或肿瘤邻近组织的样品)明显表达siglec-7的配体和/或siglec-9的配体表明个体患有可以用分别抑制siglec-7和/或siglec-9多肽的抗体治疗和/或可以从所述抗体接收益处的癌症。在一个实施例中，siglec-7的配体和/或siglec-9的配体的显著表达是指所述一个或多个配体在从给定个体获取的大量肿瘤细胞中表达。虽然不受精确百分比值的约束，但在一些实例中，可以被称为“突出表达”的配体如果存在于至少30％、40％、50％、60％、70％、80％或更多取自患者的肿瘤细胞上(在样品中)。在方法中的任一个的一个实施例中，确定患有癌症的个体内的恶性细胞(例如肿瘤细胞)是否表达siglec-7和/或siglec-9的配体包括确定siglec-7的配体和/或siglec-9的配体在生物学样品中的恶性细胞上的表达水平，并且将水平与参考水平(例如，值、弱或强的细胞表面染色等)进行比较。参考水平可以例如对应于健康个体，对应于从用抗siglec抗体的治疗中未获得/获得低临床益处的个体，或对应于从用抗siglec抗体的治疗中获得实质性临床益处的个体。确定生物学样品以增加的水平(例如，高值、强表面染色、对应于从用抗siglec抗体的治疗中获得实质性临床益处的个体的水平、比对应于从用抗siglec抗体的治疗中未获得/获得低临床益处的个体高的水平等)表达siglec-7的配体和/或siglec-9的配体表明个体患有可以用抗siglec抗体治疗的癌症。实例实例1：共表达siglec-7和siglec-9两者的人nk细胞亚群在cd33相关的siglec中，siglec-7(cd328)和siglec-9(cd329)共有与唾液酸结合的特性，包含由癌细胞过表达的聚糖，并且被认为在表达它们的免疫细胞中起抑制性受体的作用。为了研究siglec在淋巴细胞上的表达，研究了siglec-7和siglec-9在人nk细胞上的分布。通过流式细胞术，在从人类供体纯化的新鲜nk细胞上确定nk细胞上的siglec-7和siglec-9表达。nk群体被确定为cd3-cd56 细胞(抗cd3太平洋蓝-bdpharmingen#558124；抗cd56-pe-vio770-milteny#130100676)。使用了抗siglec-7抗体(克隆194211-igg1apc-r&dsystems#fab11381a)、抗siglec-9抗体(克隆191240–igg2ape-r&dsystems#fab1139p)和同种型对照igg1apc和igg2aapc。将nk细胞与50ul染色ab混合物一起温育30分钟，用染色缓冲液洗涤两次，并且用cantoii(hts)显示荧光。结果示出在图1中。示出了代表性的结果。mfi：荧光强度的平均值。很大一部分(约44％)nk细胞表达siglec-7和siglec-9两者，表明很大比例的nk细胞可以被这些受体中的每一个(或两者)抑制，作为存在于例如肿瘤细胞上的聚糖配体的函数。实例2：抗siglec抗体的产生部分a：小鼠中抗体的产生为了获得抗人siglec-7和siglec-9抗体，用人siglec-7fc和人siglec-9fc细胞外结构域重组蛋白免疫balb/c小鼠。进行了两种不同的免疫。在用siglec-7fc和siglec-9fc蛋白进行的首次免疫中，小鼠腹膜内接收了2注射剂30μg每种蛋白质的乳液和完全弗氏佐剂。然后，对小鼠静脉注射7.5μg每种蛋白质的加强免疫。进行了两种不同的融合(融合1和2)。免疫脾细胞在与x63.ag8.653永生化b细胞促进之后3天融合，并且在照射脾细胞的存在下培养。将杂交瘤铺在含有半固体甲基纤维素的培养基中，并且使用clonepix2设备(分子装置)挑取生长的克隆。再次用siglec-7fc和siglec-9fc蛋白进行第二次免疫。小鼠腹膜内接收了3注射剂30μg每种蛋白质的乳液和完全弗氏佐剂。然后，对小鼠静脉注射5μg每种蛋白质的加强免疫。进行了三种不同的融合(融合3、4和5)。免疫脾细胞在与x63.ag8.653永生化b细胞促进之后3天融合，并且在照射脾细胞的存在下培养。将杂交瘤铺在p96中的培养基中。在cho细胞中产生用于此免疫(以及在下文的实例中)的siglec-7fc和siglec-9fc蛋白。siglec-7fc蛋白具有以下氨基酸序列：qksnrkdysltmqssvtvqegmcvhvrcsfsypvdsqtdsdpvhgywfragndiswkapvatnnpawavqeetrdrfhllgdpqtknctlsirdarmsdagryffrmekgnikwnykydqlsvnvtalthrpnilipgtlesgcfqnltcsvpwaceqgtppmiswmgtsvsplhpsttrssvltlipqpqhhgtsltcqvtlpgagvttnrtiqlnvsyppqnltvtvfqgegtastalgnssslsvlegqslrlvcavdsnpparlswtwrsltlypsqpsnplvlelqvhlgdegeftcraqnslgsqhvslnlslqqeytgkmrpvsgvllgavggggsspkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk(seqidno:164)。siglec-9fc蛋白具有以下氨基酸序列：qtsklltmqssvtvqeglcvhvpcsfsypshgwiypgpvvhgywfregantdqdapvatnnparavweetrdrfhllgdphtknctlsirdarrsdagryffrmekgsikwnykhhrlsvnvtalthrpnilipgtlesgcpqnltcsvpwaceqgtppmiswigtsvspldpsttrssvltlipqpqdhgtsltcqvtfpgasvttnktvhlnvsyppqnltmtvfqgdgtvstvlgngsslslpegqslrlvcavdavdsnpparlslswrgltlcpsqpsnpgvlelpwvhlrdaaeftcraqnplgsqqvylnvslqskatsgvtqggggsspkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk(seqidno:165)。初次筛选：使用亲代和husiglec-7、husiglec-9和cynosiglec表达性cho细胞系，通过流式细胞术，在初次筛选中测试两种免疫的生长克隆的上清液(sn)。将husiglec-7、-和cynosiglec表达性cho分别用0.5μm和0.05μmcfse染色。对于流式细胞术筛选，所有细胞均匀混合，并且用alexafluor647标记的山羊抗小鼠多克隆抗体(pab)揭示上清液中反应抗体的存在。结果：在分别结合融合物1、2和3/4/5中的人siglec-7和/或siglec-9和/或siglec-cyno的相应融合物中，选择了20种、19种和多于80种抗体。克隆了来自3种不同融合物中的不同交叉反应性抗siglec-7、siglec-9和siglec-cyno抗体以及抗siglec-9抗体(不结合siglec-7)，并且生产了具有重链n297q(kabateu编号)的嵌合人igg1抗体突变，导致缺少n-联糖基化，并且减少与fcγ受体的结合。图2示出了例如抗体结合siglec-7但是不结合siglec-9或猕猴siglec(右图)，结合siglec-7、siglec-9和猕猴siglec中的每一个(中图)，以及结合siglec-9，但是不结合siglec-7或猕猴siglec(左图)的流式细胞术的代表性结果。表1：siglec序列部分b：抗siglec-9抗体的人源化通过互补性决定区(cdr)接枝，将具有本文表b中所示的相应可变区的抗体maba、mabb和mabd修饰为人源化抗体。基于3d建模研究，具有如下所示的氨基酸序列的不同重链和轻链可变区被设计成包含相应的经过修饰的maba、mabb或mabdcdr和人类框架，作为具有取代的人类igg1抗体产生，以消除fcγ受体结合。使用cho细胞产生抗体，并且测试与人siglec-9的结合。抗体maba基于3d建模研究，设计了不同的重链和轻链可变区，其包含mabacdr和作为人igg1抗体生产的人框架。产生了四个不同的重链(称为h0、h1、h2和h3)，并且产生了三个不同的轻链(称为l0、l1和l2)。重链和轻链具有特定的氨基酸取代(以下以粗体示出；带下划线的是kabatcdr)。maba：“h0”重链可变区qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasggtfssywmhwvrqapgqglewmgeinpsnghtnynekfesrvtitadeststaymelsslrsedtavyycargvesydfddaldywgqgttvtvss(seqidno:170)maba：“h1”重链可变区maba：“h2”重链可变区maba：“h3”重链可变区maba：“l0”轻链可变区diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqdinnylnwyqqkpgkapklliyytsrlhsgvpsrfsgsgsgtdftftisslqpediatyycqqgntlpftfgggtkveik(seqidno:174)maba：“l1”轻链可变区maba：“l2”轻链可变区抗体mabb基于3d建模研究，设计了不同的重链和轻链可变区，其包含mabbcdr和作为人igg1抗体生产的人框架。产生了六个不同的重链(称为h0、h1、h2、h3、h4和h5)，并且产生了三个不同的轻链(称为l0、l1和l2)。对于重链可变区，这些可变区包含：mabb重链cdr(如下所示，带下划线)、人ighv1-69基因框架1、2和3区。轻链可变区：mabb轻链cdr(如下所示，带下划线)、人igkv1-33基因框架1、2和3区。然后制备重链和轻链的组合。重链和轻链具有特定的氨基酸取代(以下以粗体示出；带下划线的是kabatcdr)。mabb：“h0”重链可变区qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasggtfssywmhwvrqapgqglewmgeinpsnghtnynekfktrvtitadeststaymelsslrsedtavyycangvetydfddamdywgqgttvtvss(seqidno:177)mabb：“h1”重链可变区mabb：“h2”重链可变区mabb：“h3”重链可变区mabb：“h4”重链可变区mabb：“h5”重链可变区mabb：“l0”轻链可变区mabb：“l1”轻链可变区diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqdinnylnwyqqkpgkapklliyftsrlhsgvpsrfsgsgsgtdytftisslqpediatyycqqgdtfpftfgggtkveik(seqidno:184)mabb：“l2”轻链可变区抗体mabc基于3d建模研究，设计了不同的重链和轻链可变区，其包含mabccdr和作为人igg1抗体生产的人框架。产生了四个不同的重链(称为h0、h1、h2和h3)，并且产生了两个不同的轻链(称为l0和l1)。然后制备重链和轻链的组合。对于重链可变区，可变区包含：mabc重链cdr(如下所示，带下划线)、人ighv7-4-1基因框架1、2和3区。轻链可变区：mabc轻链cdr(如下所示，带下划线)、人igkv7-3基因框架1、2和3区。重链和轻链具有特定的氨基酸取代(以下以粗体示出；带下划线的是kabatcdr)。mabc：“h0”重链可变区qvqlvqsgselkkpgasvkvsckasgytftnyemnwvrqapgqglewmgwintytgestyaddfkgrfvfsldtsvstaylqisslkaedtavyycarddygrsygfaywgqgtlvtvss(seqidno:192)mabc：“h1”重链可变区mabc：“h2”重链可变区mabc：“h3”重链可变区mabc：“l0”轻链可变区divltqspaslavspgqratitcrasesvdsygnsfmhwyqqkpgqppklliylasklesgvparfsgsgsgtdftltinpveandtanyychqnnedppwtfgggtkveik(seqidno:196)mabc：“l1”轻链可变区抗体mabd基于3d建模研究，设计了不同的重链和轻链可变区，其包含mabdcdr和作为人igg1抗体生产的人框架。产生了三个不同的重链(称为h0、h1和h2)，并且产生了三个不同的轻链(称为l0、l1和l2)。然后制备重链和轻链的组合。对于重链可变区，可变区包含：mabd重链cdr(如下所示，带下划线)、人ighv7-4-1*02基因框架1、2和3区以及人ighj6*01基因框架4区。轻链可变区：mabd轻链cdr(如下所示，带下划线)、人igkv1-39*01基因框架1、2和3区。重链和轻链具有特定的氨基酸取代(以下以粗体示出；带下划线的是kabatcdr)。mabd：“h0”重链可变区qvqlvqsgselkkpgasvkvsckasgytftdysmhwvrqapgqglewmgwiitetgeptyaddfrgrfvfsldtsvstaylqisslkaedtavyycardfdgywgqgttvtvss(seqidno:186)mabd：“h1”重链可变区mabd：“h2”重链可变区mabd：“l0”轻链可变区diqmtqspsslsasvgdrvtitcraseniysylawyqqkpgkapklliynaktltegvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqhhygfpwtfgggtkveik(seqidno:189)mabd：“l1”轻链可变区mabd：“l2”轻链可变区实例3：结合到cd33相关的siglec与siglec-7和-9共有序列相似性的cd33相关的siglec通常分为两组，第一个亚群由siglec-1、-2、-4和-15组成，并且cd33相关的siglecs组包含siglec-3、-5、-6、-7、-8、-9、-10、-11、-12、-14和-16。由于其它cd33相关的siglecs具有不同的生物学功能和/或被认为不参与肿瘤监测，因此进一步筛选抗体以评估是否有可能获得不结合其它cd33相关的siglecs的交叉反应性siglec-7/9抗体。产生表达siglec-3、-5、-6、-8、-10、-11和-12的细胞，并且交叉反应性的siglec-7/9抗体的代表亚群通过流式细胞术测试与细胞的结合。氨基酸序列和对本文所用的不同siglec的基因库引用示出于下表1中。简要地，使用husiglec表达性cho细胞系(表达siglecs中的一种)。对于流式细胞术筛选，将抗体与每种husiglec表达性cho细胞系(chohusiglec-3细胞系、chohusiglec-5细胞系、chohusiglec-6细胞系、chohusiglec-8细胞系、chohusiglec-10细胞系、chohusiglec-11细胞系、chohusiglec-12细胞系)一起温育1小时，在染色缓冲液中洗涤两次，用标记有pe的山羊抗小鼠多克隆抗体(pab)显露，用染色缓冲液洗涤两次，并且在htfc细胞仪上获得染色，并且使用flowjo软件进行分析。结果示出，抗siglec-9抗体maba、mabb、mabc、mabd、mabe和mabf均未与siglecs-3、-5、-6、-7、-8、-10、-11或-12中的任一个结合。结果示出，除了siglec-7和-9以外，一些交叉反应性的siglec-7/9抗体还可以结合siglec-12或siglec-6。除了siglec-7和-9以外，mab1、mab2和mab3还结合siglec-12，而mab3、mab4、mab5和mab6不结合siglec-12。示例性抗体mab1、mab2、mab3、mab4、mab5或mab6均未与siglecs-3、-5、-6、-8、-10或-11中的任一个结合。实例4：滴定抗体以结合siglec通过流式细胞术在用人siglec-7和人siglec-9和猕猴siglec-9转染的cho细胞上，通过滴定实验来测试抗体在人siglec-7、人siglec-9和猕猴siglec-9上的结合。将细胞在染色缓冲液(sb)中与20ug/ml的一抗和一系列1:5的稀释液一起温育1小时。将它们用sb洗涤3次，然后与山羊f(ab')2抗人igg(fc)pe(beckmancoulter#im05510)一起温育30分钟，并且用sb洗涤两次。用htfcintellicyt细胞仪显示荧光。发现来自2次免疫中的5种融合物的以下示出的六种抗体对如通过细胞表达的人siglec-7和人siglec-9具有可比较的结合亲和力，并且更进一步对猕猴siglec具有可比较的结合亲和力。用于结合每个抗体的ec50值(μg/ml)如下所示。实例5：通过表面等离子体共振(spr)的siglec-9结合亲和力biacoretmt100一般程序和试剂spr测量在25℃的biacoretmt200设备(biacoretmgehealthcare)上进行。在所有biacoretm实验中，hbs-ep (biacoretmgehealthcare)和naoh10mm分别用作运行缓冲液和再生缓冲液。用biacoretmt200评估软件对传感器图进行分析。人siglec-9和-7多聚体蛋白是在innatepharma克隆、生产和纯化的。蛋白质-a的固定将蛋白质共价固定在sensorchipcm5上的葡聚糖层中的羧基上。用edc/nhs(n-乙基-n'-(3-二甲基氨基丙基)碳二酰胺盐酸盐和n-羟基琥珀酰亚胺(biacoretm，gehealthcare)活化芯片表面。在偶联缓冲液(10mm乙酸盐，ph4.2和5.0)中将蛋白质稀释到10μg/ml，并且注入直至达到合适的固定水平(即600ru到2000ru)。使用100mm乙醇胺ph8(biacoretm，gehealthcare)进行剩余活化基团的失活。亲和力研究亲和力研究是根据由制造商推荐的标准动力学规程(biacoretmgehealthcare动力学向导)进行的。将处于600nm到0.975nm范围的抗siglec-9和-7/9抗体fab片段的系列稀释液依次注入固定的siglec-9fc和siglec-7fc蛋白上，并且在再生之前解离10分钟。使用1:1动力学结合模型，拟合整个传感器图集。单价亲和力以及动力学缔合和解离速率常数如下表2所示。表2实例6：单核细胞来源的树突细胞上的滴定单核细胞来源的树突细胞(modc)的产生：单核细胞来源的树突细胞由外周血单核细胞产生。pbmc是从健康供体获得的血沉棕黄层中分离出来的。使用试剂盒单核细胞分离试剂盒ii(miltenyibiotec)纯化单核细胞，并且在补充了10％灭活fbs(gibco)、谷氨酰胺(gibco)、memneaa(gibco)、丙酮酸钠(gibco)、il-4(20ng/ml)(peprotech)和gm-csf(400ng/ml)(miltenyibiotec)的rpmi培养基(gibco)中，在modc中分化总共6天。将细胞在37℃的潮湿co2培养箱中培养，并且在第4天更新细胞因子。用25mu神经氨酸酶(rochediagnostics)将modc去唾液酸2小时。在神经氨酸酶处理之前和之后：将modc细胞在染色缓冲液(sb)中与小鼠siglec-7fc(iph)和小鼠siglec-9fc重组蛋白(iph)以10ug/ml一起温育1h，用sb洗涤两次，与山羊f(ab')2抗小鼠igg(fc)pe(jacksonimmunoresearch)一起温育30分钟，用sb洗涤两次，并且用cantoii(hts)显露荧光，控制去唾液酸化。滴定通过流式细胞术，在滴定实验中测试了对modc和经过神经氨酸酶处理的modc的结合。将细胞在染色缓冲液(sb)中与10ug/ml的一抗和一系列1:10的稀释液一起温育1小时。将它们用sb洗涤两次，然后与山羊f(ab')2抗人igg(fc)pe(jacksonimmunoresearch)一起温育30分钟，并且用sb洗涤两次。用htfcintellicyt细胞仪显示荧光。结果在神经氨酸酶处理之后，ec50高度增强(10倍)，表明在神经氨酸酶处理之前，在modc上表达的siglec-9与其唾液酸配体以顺式相互作用方式进行接合。然而，平台期水平未改变，表明高亲和力抗体可以结合细胞表面上的所有siglec-9(结合和未结合)构象，并且抑制monodc以及其它细胞类型(例如，nk细胞、cd8t细胞、单核细胞和巨噬细胞m1和m2)中的顺式相互作用和信号传导。图3中示出了代表性抗体maba、mabc和mabd在modc(左图)和经过神经氨酸酶处理的modc(右图)中的结果，以及它们相应的ec50值。实例7：评估抗体中和nk细胞中siglec活性的能力在第一次和第二次免疫中测试的抗siglec-7/9抗体在nk细胞活化测定中，使用原代nk细胞(从人类供体中纯化的新鲜nk细胞，在使用之前，在37℃下温育过夜)测试了siglec活性的阻断。在24小时内增加cd137表达与包含nk细胞的几种淋巴细胞的活化相关(kohrt等人(2011)《血液(blood)》117(8):2423-2432)。通过流式细胞术分析cd137在nk细胞上的表达，确定了抗siglec-7/9抗体和靶细胞去唾液酸化对nk细胞活化的影响。抗siglec-7/9mabmab1、mab2、mab3、mab4、mab5和mab6中的每一个诱导24小时处cd137表达的增加。然后，通过细胞毒性测定(cr51)，以ytssiglec-9*效应细胞系(用人siglec-9转染的人nk细胞系yts)作为效应细胞，并且ramos细胞系作为靶，研究了抗siglec-7/9抗体的作用。此测试通过直接定量51cr加载的靶细胞裂解来测量ytssiglec-9*细胞系的细胞毒性。简而言之，首先用放射性51cr同位素标记靶细胞，并且然后在37℃与效应细胞共温育4小时。在此时间期间，裂解对yts细胞敏感的靶细胞，将51cr释放到培养基中。通过液体闪烁计数，测量回收的上清液中的51cr。获得的结果允许评估nk细胞对靶细胞的裂解百分比。测定是在96u孔板中以完整rpmi，200μl终/孔，e:t比为5/1完成的。以10ug/ml和一系列1:10的稀释度添加抗siglec-7/9抗体和同种型对照。抗siglec-7/9mabmab1、mab2、mab3、mab4、mab5和mab6中的每一个均以剂量依赖性方式诱导ytssiglec-9*细胞毒性的增加。作为对照，未在野生型yts细胞系上观察到此作用(无siglec-9表达)。类似地，抗siglec-9mabmaba、mabb、mabc、mabd、mabe和mabf中的每一个以剂量依赖性方式诱导ytssiglec-9*细胞毒性的增加。图4示出了在siglec-7和-9交叉反应抗体中(图4b)和在siglec-9单特异性(非siglec-7结合)抗体中(图4a)ytssiglec-9*细胞毒性的增加的剂量依赖性诱导。实例8：原代人nk细胞中siglec-9中和的详细研究(低siglec-9表达)我们认为，例如，与嗜中性粒细胞和在其表面处表达更高水平的siglec-9的其它细胞以及在不同的nk细胞亚群中表达的siglec-7相比，先前的抗体无法中和nk细胞中的siglec-9的可能性可能与原代nk细胞中siglec-9表达的差异有关。为了研究是否可以获得中和nk细胞中siglec-9的抗体，我们研究并选择了来自许多人类供体的原代nk细胞中的抗体，并且通过流式细胞术对siglec-9进行门控。通过在经典的51cr释放测定中评估肿瘤细胞裂解来通过细胞毒性，并且通过评估nk细胞上cd137表面的表达来通过活化测定来研究抗siglec-9抗体的作用。在每种情况下，将原代nk细胞(作为从供体中纯化的新鲜nk细胞)用作效应细胞，并且将ht29结肠直肠癌细胞系用作靶标。部分1：细胞毒性测定：在两个人类供体中纯化的nk与ht29肿瘤细胞细胞毒性测定通过直接定量51cr加载的靶细胞裂解来测量nk细胞的细胞毒性。简而言之，首先用放射性51cr同位素标记靶细胞，并且然后在37℃与效应细胞共温育4小时。在此时间期间，裂解对nk细胞敏感的靶细胞，将51cr释放到培养基中。通过液体闪烁计数，测量回收的上清液中的51cr。获得的结果允许评估nk细胞对靶细胞的裂解百分比。测定是在96u孔板中以完整rpmi，200μl终/孔，e:t比为8/1完成的。以10ug/ml添加抗siglec-9抗体和同种型对照。抗siglec9抗体maba、mabb、mabc、mabd、mabe和mabf以及抗siglec7/9抗体mab1、mab2、mab3、mab4、mab5和mab6中的每一个引起nk细胞细胞毒性的增加。图5是代表性图，示出了在两种不同的人类供体(供体d1(左图)和d2(右图))中由抗体maba、mabc、mabd、mabe和mabf介导的原代nk细胞细胞毒性的增加。部分2：活化测定(cd137)：单个人类供体中纯化的nk与ht29、mab的比较通过流式细胞术分析siglec-9阳性nk细胞上的cd137表达来确定抗siglec-7/9和抗siglec-9抗体对nk细胞活化的作用。效应细胞是原代nk细胞(从供体中纯化的新鲜nk细胞，在使用之前在37℃下温育过夜)并且靶细胞(ht29细胞系)以1:1的比例混合。cd137测定是在96u孔板中以完整rpmi，200μl终/孔完成的。将抗体与效应细胞在37℃下预温育30分钟，并且然后将靶细胞在37℃下共温育过夜。以下步骤是：以500g旋转3分钟；用染色缓冲液(sb)洗涤两次；加入50μl染色ab混合物(抗cd3太平洋蓝-bdpharmingen；抗cd56-pe-vio770(miltenyi)；抗cd137-apc(miltenyi)，抗siglec-9k8-pe(biolegend)；在4℃下温育30分钟；用sb洗涤两次；用sb重悬沉淀物；并且用cantoii(hts)显示荧光。阴性对照是nk细胞与单独的ht29，并且存在同种型对照。图6是代表性图，其示出了表达由几种抗siglec-9和抗siglec-7/9抗体maba、mabb、mabf、mab6和mab4介导的cd137的siglec-9阳性nk细胞％的增加。作为对照，表达cd137的siglec-9阴性nk细胞的％不受这些抗体的影响。从图中可以看出，抗siglec-9抗体将siglec-9表达性原代人nk细胞的细胞毒性完全恢复到在同一供体的siglec-9阴性原代人nk细胞中观察到的水平。部分3：活化测定(cd137)：在6个人类供体中纯化的nk与ht29、maba和mab1通过使用一种抗siglec-9(mab.a)和一种抗siglec-7/9(mab1)对6个供体进行了实验复制。在不存在抗体的情况下(“培养基”设置)，表达cd137的nk的％在供体的6％与27％之间变化(参见(图7，左图))。将数据归一化为与来自每个实验的对照培养基值相比的相对变化：((x-x培养基)/x培养基)(％)。如图7所示，maba和mab1诱导了siglec-9 cd137 nk％的增加(图7，中图)，而不是siglec-9-cd137 nk％的增加(图7，右图)。实例9：在原代nk细胞上的滴定通过流式细胞术的滴定实验测试了抗体在新鲜纯化的人nk细胞上的结合。将细胞在染色缓冲液(sb)中与10ug/ml的一抗和一系列1:10的稀释液一起温育1小时。将它们用sb洗涤三次，然后与山羊f(ab')2抗人igg(fc)pe(jacksonimmunoresearch)一起温育30分钟。在bdfacscantoii上获得染色，并且使用flowjo软件进行分析。下表中以μg/ml示出ec50值(使用4参数逻辑拟合计算)。平均ec50(μg/ml)-4个供体mab10.05mab20.07mab30.19mab40.61mab51.27mab61.30maba0.08mabb0.10mabc0.09mabe0.01mabf0.30实例10：siglec与唾液酸配体结合的阻断部分a：通过流式细胞术对siglec-9与表达肿瘤细胞的唾液酸的结合的阻断将一定剂量范围的抗人siglec-9fab与固定剂量的人siglec-9fc融合重组蛋白在室温下共温育30分钟，然后加入各种表达唾液酸的细胞系k562e6(用人hla-e转染的k562细胞系(人类慢性骨髓性白血病(cml)细胞；atcctm参考ccl-243tm))和ramos，持续1小时。在染色缓冲液中洗涤细胞两次之后，将在染色缓冲液中稀释的pe偶联的山羊抗小鼠iggfc片段二抗(jacksonimmunoresearch)添加到细胞中，并且将平板在4℃下再温育30分钟。将细胞洗涤两次，并且在配备有htfc酶标仪的accuryc6流式细胞仪上进行分析。将fab和siglec-9fc融合重组蛋白的荧光平均值相对于比率绘制在图上。结果示出在图8中。在上图上，示出了在抗体的存在下，siglec-9-fc蛋白与ramos细胞的结合。抗siglec-9mabmaba、mabb、mabc和mabd各自抑制siglec-9-fc蛋白与ramos细胞的结合，而mabe示出部分抑制siglec-9-fc蛋白与ramos细胞结合的能力，并且mabf并未显著抑制siglec-9-fc蛋白与ramos细胞的结合。在图8的下图，示出了在抗体的存在下，siglec-9-fc蛋白与k562细胞的结合。抗siglec/9mabmaba、mabb、mabc和mabd各自抑制siglec-9-fc蛋白与ramos细胞的结合，而mabe和mabf两者均示出部分抑制siglec-9-fc蛋白与k562细胞结合的能力，并且仅在明显更高的抗体浓度下。总之，抗体maba、mabb、mabc和mabd完全阻断了siglec-9与其在肿瘤细胞上的唾液酸配体的结合，而抗体mabe的阻断依赖于表达唾液酸的细胞系，并且mabf并不阻断结合。使用具有maba或mabd的重链和轻链cdr的人源化抗体重复实验。表c中本文列出的人源化maba和mabd抗体中的每一种(具有实例2的vh和vl的组合)分别证明了对siglec-9-fc蛋白与ramos细胞的结合的抑制与对相应的亲代maba或mabd抗体的结合的抑制相当。部分b：通过elisa测定对siglec-7和-9与唾液酸化配体的结合的阻断。唾液酸是糖基化蛋白质和脂质上形成的九碳羧化单糖。包含唾液酸转移酶(催化其生物合成)和唾液酸酶的几种酶也称为神经氨酸酶(催化其裂解)调节它们在哺乳动物系统中的发生。在癌症中，改变的唾液酸谱起着增强肿瘤生长、转移和逃避免疫监视的主导作用，从而导致癌细胞存活(bork等人，《药学科学杂志(jpharmsci.)》2009年10月；98(10):3499-508)。已经报道了几种癌症中唾液酸化的增加以及调节唾液酸化的酶谱的改变。st3gal6酶在多发性骨髓瘤细胞系和患者中过表达，并且在体外与多发性骨髓瘤细胞表面上α-2,3-连接的唾液酸的表达有关。在体内，st3gal6的敲低与多发性骨髓瘤细胞向骨髓壁的归巢和移植减少、肿瘤负担减轻和存活延长有关(glavey等人，《血液(blood)》2014年9月11日；124(11):1765-76)。胶质瘤中高st3gal1酶表达与间充质分子分类的更高肿瘤等级相关(chong等人，《国家癌症研究所期刊(natlcancerinst.)》2015年11月7日；108(2))。异常启动子甲基化在癌症中几种唾液酸转移酶表达的调节中起作用(vojta等人，《生物化学与生物物理学报(biochimbiophysacta.)》2016年1月12日)。在膀胱癌中，异常的st6gal1启动子甲基化诱导st6gal1表达缺失(antony等人，《bmc癌症(bmccancer)2014年12月2日；14:901)。siglec-7和siglec-9结合各种唾液酸键。印在芯片上的唾液酸文库识别了几种siglec和一个选择性siglec-7配体共有的唾液酸配体(rillahan等人，《acs化学生物学杂志(acschembiol.)》2013年7月19日；8(7):1417-22)。考虑到siglec-7和siglec-9可能对唾液酸有不同的识别，鉴于各种唾液酸转移酶和唾液酸，将siglec-7和-9两者靶向免疫细胞可以靶向多种癌症类型。在elisa测定中测试了抗siglec-7/9抗体对siglec-7和-9与唾液酸化的配体之间的相互作用的阻断。siglec蛋白是siglec-7人fc和siglec-9人fc重组蛋白，并且配体是具有唾液酸化三糖的生物素化聚合物(neu5aca2-3galb1-4glcnacb-paa-生物素glycotech#01-077称为“sia1”和6'-唾液乳糖-paa-生物素glycotech#01-039(称为“sia2”)。简而言之，将蛋白a在4℃下包被在elisa板上过夜。洗涤3次并且饱和之后，在室温下以0.8μg/孔添加siglec-7fc和siglec-9fc，持续1小时30分钟。洗涤3次之后，以20ug/ml和一系列1:5的稀释度添加mab。洗涤3次之后，在室温下加入生物素化的唾液酸化聚合物，持续3小时。洗涤3次之后，以1:1000加入链霉亲和素-过氧化物酶(beckman)。最后，通过在黑暗中在室温下添加tmb(interchim)来揭示唾液酸化的聚合物在siglec-7和-9蛋白上的结合，并且通过添加h2s04终止反应。在450nm处读取吸光度。结果示出在图9和10中。mab1、2、4、5和6阻断了siglec-7与sia2的相互作用，但mab3并不阻断(图9)。所有mab都阻断了siglec-9与sia2的相互作用(图10)，然而mab1、mab2和mab3示出抑制siglec-9与sia1的相互作用的能力很低(图10)，并且因此基本上没有阻断sia1相互作用。mab5和mab6阻断了siglec-9与sia1的相互作用，并且mab4具有阻断siglec-9与sia1相互作用的中间能力。对siglec-9的阻断作用取决于唾液酸类型。总体上，用抗siglec-9抗体maba、mabb、mabc和mabd观察到最完全的抑制，其基本上实现了完全抑制siglec-9与唾液酸的相互作用。实例11：在表达siglec的细胞上滴定人源化抗体通过流式细胞术在滴定实验中，在用人siglec-9转染的cho细胞上测试了人源化抗体的结合。将细胞在37℃下在染色缓冲液(sb)中与10ug/ml的一抗和一系列1:10的稀释液一起温育90分钟。将它们用sb洗涤三次，然后与山羊f(ab')2抗人igg(fc)pe一起温育30分钟。用于表达siglec-9的细胞的ec50值(μg/ml)如下所示。实例12：评估人源化抗体中和nk细胞中siglec活性的能力细胞毒性测定通过直接定量51cr加载的k562靶细胞裂解来测量nk细胞的细胞毒性。简而言之，首先用放射性51cr同位素标记靶细胞，并且然后在37℃与效应细胞(转导以表达siglec-9(khyg-1siglec-9*)的nk细胞系)共温育4小时。在此时间期间，裂解对nk细胞敏感的靶细胞，将51cr释放到培养基中。通过液体闪烁计数，测量回收的上清液中的51cr。获得的结果允许评估nk细胞对靶细胞的裂解百分比。测定是在96u孔板中以完整rpmi，200μl终/孔，e:t比为8/1完成的。以10ug/ml添加具有mab.a的重链和轻链cdr的人源化抗体或具有mab.d的重链和轻链cdr的人源化抗体。经过测试的表2的人源化抗体中的每一种(实例2中产生的vh和vl的组合)以剂量依赖性方式诱导nk细胞毒性的增加。实例13：使用点突变体的抗siglec抗体的表位为了定义抗siglec-9抗体的表位，首先通过用hek293t细胞中的标记v5表达每个单独的siglec-9结构域(v集ig样结构域、ig样c2型结构域1和ig样c2型结构域2)，并且测试抗体与每种蛋白质的结合来识别我们的抗体的结合结构域。设计siglec-9突变体，其通过暴露于n末端v集ig样结构域的表面上方的分子表面的氨基酸取代来定义。siglec-9的结构尚未解析，并且在可用的siglec结构中，siglec-7是最接近的成员(与siglec-9氨基酸序列的同一性超过80％)。因此，我们使用siglec-7结构设计了siglec-9突变体。seqidno:2的多肽的天然siglec-9肽前导被取代前导序列和v5标记(示出在表1中的siglec-9结构域蛋白v集ig样结构域、ig样c2型结构域1和ig样c2型结构域2中)替换，随后是表1的siglec-9氨基酸序列，其中并入表3中列出的氨基酸取代。蛋白在hek293t细胞系中表达。所有附图(图11-14)对应于siglec-7结构107v的n末端v集ig样结构域，如上文alphey等人(2003)所述。图以浅色阴影示出了包含精氨酸124的配体结合区域，所述精氨酸是所有siglecs中保存的关键残基，用于与末端唾液酸糖上的羧基和在siglec-7与siglec-9之间保存的周围残基w132、k131、k135和n133相互作用，并且也被描述为唾液酸结合所必需的。w132提供与唾液酸的甘油部分的疏水性相互作用。表3中的靶向氨基酸突变是在siglec-7和-9两者中存在的残基，并且使用对于siglec-7的seqidno:1或对于siglec-9的seqidno:2的编号示出(野生型siglec-9中的残基/残基的位置/突变体中的残基)。表3突变体的产生通过pcr产生siglec-9突变体。扩增的序列在琼脂糖凝胶上电泳，并且使用machereynagelpcrclean-upgelextraction试剂盒纯化。然后用clontechinfusiontm系统将为每种突变体生成的纯化的pcr产物连接到表达载体中。将含有突变序列的载体制备成miniprep并且测序。测序之后，使用promegapureyieldtm质粒midiprep系统，将含有突变序列的载体制备成midipreptm。hek293t细胞在dmem培养基(invitrogen)中生长，使用invitrogen的lipofectaminetm2000用载体转染，并且在测试转基因表达之前，在37℃下在co2培养箱中温育24或48小时。流式细胞术分析抗siglec-9与hek293t转染的细胞的结合抗体mab4、mab5和mab6结合ig样c2型结构域1，而maba、mabb、mabc、mabd、mabe、mabf、mab1、mab2和mab3结合n末端v集ig样结构域。通过流式细胞术测试了v集ig样结构域结合抗体与突变体1-16中的每一个的结合。进行第一实验，以确定在一个浓度下失去与一个或几个突变体结合的抗体。为了确认结合的失去，对似乎受siglec-9突变影响结合的抗体进行了抗体滴定。然后将抗体进一步测试为fab'片段，因为fab'片段对结合失去更敏感，从而提供了更多的结合位点细节。结果示出在下面的表4中(“ ”表示未降低结合，“ /-”表示降低了结合，“-”表示完全失去结合，“nd”表示未完成)。抗体未失去与突变体m2的结合，所述突变体包含在群体中变化的残基k100(参考seqidno:2的siglec-9)或k104(参考seqidno:1的siglec-7)处的变体；因此，抗体将结合表1中所示的siglec-9等位基因(seqidno:160)。抗siglec-7和-9特异性抗体mab1、mab2和mab3以及siglec-9特异性抗体mabe和mabf都失去了与siglec-9的突变体m9、m10和m11的结合，但是没有失去与任何其它突变体的结合。突变体9在残基n78、p79、a80、r81、a82和v83(参考siglec-9)处含有氨基酸取代，表明突变体的残基中的一个或多个或所有残基对这些抗体的核心表位很重要。突变体10在残基n77、d96、h98和t99处含有氨基酸取代，表明突变体的残基中的一个或多个或所有残基对这些抗体的核心表位很重要。突变体11在残基w84、e85、e86和r88处含有氨基酸取代，表明突变体的残基中的一个或多个或所有残基对这些抗体的核心表位很重要。当呈f(ab)形式时，mab1已经额外减少了与突变体7的结合，所述突变体在残基p55、h58、e122、g124、s125和k127处具有氨基酸取代，表明突变体的残基中的一个或多个或所有残基对此抗体的表位很重要。当呈fab'形式时，mabe和mabf已经额外减少了与突变体8的结合；突变体8在残基r63、a66、n67、t68、d69、q70和d71(参考siglec-9)处含有氨基酸取代，表明突变体的残基中的一个或多个或所有残基对这些抗体的表位很重要。如图11a所示，发现在m9、m10和m11中取代的残基位于n末端v集ig样结构域的一侧(深色阴影)，远离含有唾液酸结合位点的一面(浅色阴影)，并且如图11b所示，发现m7位于唾液酸结合位点附近(中等阴影)。图11c中所示的是在m9、m10和m11中取代的残基，发现所述残基位于n末端v集ig样结构域的一侧(深色阴影)，远离含有唾液酸结合位点的一面(浅色阴影)，并且发现m8位于限定了siglecs的唾液酸配体特异性，而不限定部分地覆盖配体结合区的m16的m15的cc'环结构域中(参见，例如alphey等人，2003《生物化学杂志(j.biol.chem.)》278(5):3372-3377)。因此，抗体mab1可以在不结合c-c'环的情况下实现阻断siglec-9的高效能，而mabe和mabf可能至少部分地在c-c'环结构域中结合。抗siglec-9特异性抗体mabd失去与突变体m6的结合，并且已经降低了与突变体m7的结合，但是未降低与任何其它突变体的结合。突变体6在残基s47、h48、g49、w50、i51、y52、p53和g54(参考siglec-9)处含有氨基酸取代，表明突变体的残基中的一个或多个或所有残基对抗体的核心表位很重要。当呈fab'形式时，mabd额外失去了与突变体7的结合，表明突变体的残基中的一个或多个或所有残基对抗体的表位很重要。如图12所示，在含有唾液酸结合位点但是在配体结合位点之外的n末端v集ig样结构域表面(浅色阴影)的顶部发现了在m6中取代的残基(深色阴影)。m7含有可能部分地重叠到配体结合区中的残基(在浅色阴影下)。m7在残基p55、h58、e122、g124、s125和k127(参考siglec-9)处包含氨基酸取代。抗体不会失去与在c-c'环结构域中具有突变的m8或与部分地覆盖配体结合区的m16的m15的结合。抗siglec-9特异性抗体maba和mabb两者失去了与siglec-9的突变体m16的结合，但是没有失去与任何其它突变体的结合。突变体16在残基k131和h136(参考siglec-9)处含有氨基酸取代，表明突变体的残基中的一个或多个或所有残基对这些抗体的核心表位很重要。当呈fab'形式时，maba和mabb额外失去与突变体14的结合，所述突变体在残基r120、w128和n129a处具有氨基酸取代，表明突变体的残基中的一个或多个或所有残基对这些抗体的表位很重要。有趣的是，虽然m14和m16在siglec-9的唾液酸配体接触位点附近或之内(对于m16，参见图13a，并且对于m14和m16，参见图13b)，但是抗体并未失去与m8的结合(c-c'环结构域突变体，也未失去与m15的结合)。因此，抗体在阻断siglec-9方面以及此外在唾液酸接触区域内均具有高效力，但是不结合c-c'环。另一个方面，抗体mabc失去了与siglec-9的突变体m8的结合(即在c-c'环内)，并且与m15和m16的结合降低，但是没有完全失去与m15或m16的结合，但是mabc并未失去或已经降低与m6、m7或m8或m9、m10或m11(也未失去或已经降低与任何其它突变体)的结合。突变体8在残基r63、a66、n67、t68、d69、q70和d71(参考siglec-9)处含有氨基酸取代，表明突变体的残基中的一个或多个或所有残基对这些抗体的表位很重要。当呈fab'形式时，mabc失去与突变体16的结合(在残基k131和h136处具有氨基酸取代)，并且已经降低了与突变体14(在残基r120、w128和n129处具有氨基酸取代)和突变体15(在残基h133、r134、r116和s27处具有氨基酸取代)的结合，表明这些突变体的残基中的一个或多个或所有残基对抗体的表位很重要。在m8中突变的残基示出在图14a中。在m8、m14、m15和m16中突变的残基示出在图14b中。因此，抗体结合唾液酸接触区域中的残基，包含在限定siglecs的唾液酸特异性的c-c'环结构域中的残基。表4本文引用的所有参考文献，包含出版物、专利申请和专利均通过引用以其整体在此并入，其程度如同每个参考文献被单独且具体地指出通过引用并入，并且在本文中完整地阐述(在法律允许的最大范围内)，不论是否单独提供了本文其它地方参考的特定文件的并入。除非本文中另有所指或明显与上下文相矛盾，否则在描述本发明的上下文中使用的术语“一个/一种(a/an)”和“所述(the)”以及类似的指代词应被解释为涵盖单数和复数两者。除非另有说明，否则本文提供的所有精确值均代表对应的近似值(例如，关于特定因子或测量提供的所有确切示例性值可以被视为还提供对应的近似测量，由“约”修饰，在适当的情况下)。本发明使用如“包括”、“具有”、“包含”或“含有”等术语的本文对任何方面或实施例的描述旨在提供对本发明的“由所述一个或多个特定元素组成”、“基本上由所述一个或多个特定元素组成”或“基本上包括所述一个或多个特定元素”的类似方面或实施例的支持，除非另有说明或明确与上下文矛盾(例如，本文描述的包括特定元素的组合物应理解为还描述由所述元素组成的组合物，除非另有说明或明确与上下文矛盾)。除非另外声明，否则本文提供的任何和所有实例或示例性语言(例如，“如”)的使用仅旨在更好地阐明本发明，并且不对本发明的范围构成限制。本说明书中的任何语言都不应被解释为将任何未要求保护的元件指示为实践本发明所必须的。序列表<110>innatepharma<120>siglec中和性抗体<130>sig794<150>us62/530,463<151>2017-07-10<150>us62/554,750<151>2017-09-06<160>200<170>patentin版本3.5<210>1<211>467<212>prt<213>智人（homosapiens）<400>1metleuleuleuleuleuleuproleuleutrpglyarggluargval151015gluglyglnlysserasnarglysasptyrserleuthrmetglnser202530servalthrvalglngluglymetcysvalhisvalargcysserphe354045sertyrprovalaspserglnthraspseraspprovalhisglytyr505560trppheargalaglyasnaspilesertrplysalaprovalalathr65707580asnasnproalatrpalavalglnglugluthrargaspargphehis859095leuleuglyaspproglnthrlysasncysthrleuserileargasp100105110alaargmetseraspalaglyargtyrphepheargmetglulysgly115120125asnilelystrpasntyrlystyraspglnleuservalasnvalthr130135140alaleuthrhisargproasnileleuileproglythrleugluser145150155160glycyspheglnasnleuthrcysservalprotrpalacysglugln165170175glythrproprometilesertrpmetglythrservalserproleu180185190hisproserthrthrargserservalleuthrleuileproglnpro195200205glnhishisglythrserleuthrcysglnvalthrleuproglyala210215220glyvalthrthrasnargthrileglnleuasnvalsertyrpropro225230235240glnasnleuthrvalthrvalpheglnglygluglythralaserthr245250255alaleuglyasnserserserleuservalleugluglyglnserleu260265270argleuvalcysalavalaspserasnproproalaargleusertrp275280285thrtrpargserleuthrleutyrproserglnproserasnproleu290295300valleugluleuglnvalhisleuglyaspgluglygluphethrcys305310315320argalaglnasnserleuglyserglnhisvalserleuasnleuser325330335leuglnglnglutyrthrglylysmetargprovalserglyvalleu340345350leuglyalavalglyglyalaglyalathralaleuvalpheleuser355360365phecysvalilepheilevalvalargsercysarglyslysserala370375380argproalaalaaspvalglyaspileglymetlysaspalaasnthr385390395400ileargglyseralaserglnglyasnleuthrglusertrpalaasp405410415aspasnproarghishisglyleualaalahisserserglygluglu420425430arggluileglntyralaproleuserphehislysglygluprogln435440445aspleuserglyglnglualathrasnasnglutyrsergluilelys450455460ileprolys465<210>2<211>463<212>prt<213>智人（homosapiens）<400>2metleuleuleuleuleuproleuleutrpglyarggluargalaglu151015glyglnthrserlysleuleuthrmetglnserservalthrvalgln202530gluglyleucysvalhisvalprocysserpheserty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技术特征：1.一种抗体，其结合人siglec-9多肽，并且能够中和由人nk细胞表达的siglec-9多肽的抑制活性，其中所述抗体的特征在于与结合到seqidno:2的野生型siglec-9多肽相比，减少了作为fab'片段与在残基k131和h132处具有突变的siglec-9多肽的结合，以及与在残基r120、w128和n129处具有突变的siglec-9多肽的结合；其中氨基酸残基是参考seqidno:2的所述siglec-9多肽来指示的。
2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包括重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)，所述重链可变区包括具有seqidno:15中示出的氨基酸序列的所述vh结构域的cdr1、2和3以及人ighv1-69(或任选地ighv1-46)基因区段的fr1、2和3，所述轻链可变区包括具有seqidno:16中示出的氨基酸序列的所述vl结构域的cdr1、2和3以及人igkv1-33基因区段的fr1、2和3。
3.根据权利要求1或2所述的抗体，其中所述抗体包括vh和vl，所述vh包括与seqidno:170、171、172和173中分别示出的mabah0、h1、h2或h3可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列，所述vl包括与seqidno:174、175和176中分别示出的mabal0、l1或l2可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列。
4.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包括重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)，所述重链可变区包括具有seqidno:17中示出的氨基酸序列的所述vh结构域的cdr1、2和3以及人ighv169(或任选地ighv1-46)基因区段的fr1、2和3，所述轻链可变区包括具有seqidno:18中示出的氨基酸序列的所述vl结构域的cdr1、2和3以及人igkv1-33基因区段的fr1、2和3。
5.根据权利要求1或4所述的抗体，其中所述抗体包括vh和vl，所述vh包括与seqidno:177、178、179、180、181和182中分别示出的mabbh0、h1、h2、h3、h4或h5可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列，所述vl包括与seqidno:183、184和185中分别示出的mabbl0、l1或l2可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列。
6.一种抗体，其结合人siglec-9多肽，并且能够中和由人nk细胞表达的siglec-9多肽的抑制活性，其中所述抗体的特征在于与结合到seqidno:2的野生型siglec-9多肽相比，减少了作为fab'片段与在残基p55、h58、e122、g124、s125和k127处具有突变的siglec-9多肽、在残基n78、p79、a80、r81、a82和v83处具有突变的siglec-9多肽、在残基n77、d96、h98和t99处具有突变的siglec-9多肽以及在残基w84、e85、e86和r88处具有突变的siglec-9多肽的结合；其中氨基酸残基是参考seqidno:2的所述siglec-9多肽来指示的。
7.一种抗体，其结合人siglec-9多肽，并且能够中和由人nk细胞表达的siglec-9多肽的抑制活性，其中所述抗体的特征在于与结合到seqidno:2的野生型siglec-9多肽相比，减少了作为fab'片段与在残基r63、a66、n67、t68、d69、q70和d71处具有突变的siglec-9多肽、在残基n78、p79、a80、r81、a82和v83处具有突变的siglec-9多肽、在残基n77、d96、h98和t99处具有突变的siglec-9多肽以及在残基w84、e85、e86和r88处具有突变的siglec-9多肽的结合；其中氨基酸残基是参考seqidno:2的所述siglec-9多肽来指示的。
8.一种抗体，其结合人siglec-9多肽，并且能够中和由人nk细胞表达的siglec-9多肽的抑制活性，其中所述抗体的特征在于与结合到seqidno:2的野生型siglec-9多肽相比，减少了作为fab'片段与在残基s47、h48、g49、w50、i51、y52、p53和g54处具有突变的siglec-9多肽的结合，以及与在残基p55、h58、e122、g124、s125和k127处具有突变的siglec-9多肽的结合；其中氨基酸残基是参考seqidno:2的所述siglec-9多肽来指示的。
9.根据权利要求8所述的抗体，其中所述抗体包括重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)，所述重链可变区包括具有seqidno:21中示出的氨基酸序列的所述vh结构域的cdr1、2和3以及人ighv7-4-1基因区段(任选地与ighj6基因区段组合)的fr1、2和3，所述轻链可变区包括具有seqidno:22中示出的氨基酸序列的所述vl结构域的cdr1、2和3以及人igkv1-39基因区段的fr1、2和3。
10.根据权利要求9所述的抗体，其中所述抗体包括vh和vl，所述vh包括与seqidno:186、187和188中分别示出的mabdh0、h1或h2可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列，所述vl包括与seqidno:189、190和191中分别示出的mabdl0、l1或l2可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列。
11.一种抗体，其结合人siglec-9多肽，并且能够中和由人nk细胞表达的siglec-9多肽的抑制活性，其中所述抗体的特征在于与结合到seqidno:2的野生型siglec-9多肽相比，减少了作为fab'片段与在残基k131和h132处具有突变的siglec-9多肽的结合，以及与在残基r63、a66、n67、t68、d69、q70和d71处具有突变的siglec-9多肽的结合；其中氨基酸残基是参考seqidno:2的所述siglec-9多肽来指示的。
12.根据权利要求11所述的抗体，其中所述抗体另外的特征在于，与结合到seqidno:2的野生型siglec-9多肽相比，减少了作为f(ab)片段与在残基s27、r116、h133和r134处具有突变的siglec-9多肽的结合；其中氨基酸残基是参考seqidno:2的所述siglec-9多肽来指示的。
13.根据权利要求11或12所述的抗体，其中所述抗体另外的特征在于，与结合到seqidno:2的野生型siglec-9多肽相比，减少了作为fab'片段与在残基r120、w128和n129处具有突变的siglec-9多肽的结合；其中氨基酸残基是参考seqidno:2的所述siglec-9多肽来指示的。
14.根据权利要求11到13中任一项所述的抗体，其中所述抗体包括重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)，所述重链可变区包括具有seqidno:19中示出的氨基酸序列的所述vh结构域的cdr1、2和3以及人ighv7-4-1基因区段的fr1、2和3，所述轻链可变区包括具有seqidno:20中示出的氨基酸序列的所述vl结构域的cdr1、2和3以及人igkv7-3基因区段的fr1、2和3。
15.根据权利要求10到14中任一项所述的抗体，其中所述抗体包括vh和vl，所述vh包括与seqidno:192、193、194和195中分别示出的mabch0、h1、h2或h3可变结构域中任一个的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列，所述vl包括与seqidno:196和197中分别示出的mabcl0或l1可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列。
16.一种试剂，其结合人siglec-9多肽，并且能够中和由人nk细胞表达的siglec-9多肽的抑制活性，其中所述试剂包括抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包括选自由以下组成的组的重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)组合：
vh和vl，所述vh包括具有seqidno:15中示出的氨基酸序列的所述vh结构域的cdr1、2和3以及人ighv1-69(或任选地ighv1-46)基因区段的fr1、2和3，所述vl包括具有seqidno:16中示出的氨基酸序列的所述vl结构域的cdr1、2和3以及人igkv1-33基因区段的fr1、2和3；
vh和vl，所述vh包括具有seqidno:17中示出的氨基酸序列的所述vh结构域的cdr1、2和3以及人ighv1-69(或任选地ighv1-46)基因区段的fr1、2和3，所述vl包括具有seqidno:18中示出的氨基酸序列的所述vl结构域的cdr1、2和3以及人igkv1-33基因区段的fr1、2和3；
vh和vl，所述vh包括具有seqidno:19中示出的氨基酸序列的所述vh结构域的cdr1、2和3以及人ighv7-4-1基因区段的fr1、2和3，所述vl包括具有seqidno:20中示出的氨基酸序列的所述vl结构域的cdr1、2和3以及人igkv7-3基因区段的fr1、2和3；以及
vh和vl，所述vh包括具有seqidno:21中示出的氨基酸序列的所述vh结构域的cdr1、2和3以及人ighv7-4-1基因区段(任选地与ighj6基因区段组合)的fr1、2和3，所述vl包括具有seqidno:22中示出的氨基酸序列的所述vl结构域的cdr1、2和3以及人igkv1-39基因区段的fr1、2和3。
17.一种试剂，其结合人siglec-9多肽，并且能够中和由人nk细胞表达的siglec-9多肽的抑制活性，其中所述试剂包括抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包括vh和vl，所述vh包括与seqidno:170、171、172和173中分别示出的mabah0、h1、h2或h3可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列，所述vl包括与seqidno:174、175和176中分别示出的mabal0、l1或l2可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列。
18.一种试剂，其结合人siglec-9多肽，并且能够中和由人nk细胞表达的siglec-9多肽的抑制活性，其中所述试剂包括抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包括vh和vl，所述vh包括与seqidno:177、178、179、180、181和182中分别示出的mabbh0、h1、h2、h3、h4或h5可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列，所述vl包括与seqidno:183、184和185中分别示出的mabbl0、l1或l2可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列。
19.一种试剂，其结合人siglec-9多肽，并且能够中和由人nk细胞表达的siglec-9多肽的抑制活性，其中所述试剂包括抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包括vh和vl，所述vh包括与seqidno:192、193、194和195中分别示出的mabch0、h1、h2或h3可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列，所述vl包括与seqidno:196和197中分别示出的mabcl0或l1可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列。
20.一种试剂，其结合人siglec-9多肽，并且能够中和由人nk细胞表达的siglec-9多肽的抑制活性，其中所述试剂包括抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包括vh和vl，所述vh包括与seqidno:186、187和188中分别示出的mabdh0、h1或h2可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列，所述vl包括与seqidno:189、190和191中分别示出的mabdl0、l1或l2可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列。
21.根据前述权利要求中任一项所述的试剂或抗体，其中所述试剂或抗体是人抗体或人源化抗体。
22.根据前述权利要求中任一项所述的试剂或抗体，其中所述试剂或抗体是能够与siglec-9多肽二价结合的单克隆抗体或抗体片段。
23.根据前述权利要求中任一项所述的试剂或抗体，其中在标准的4小时体外51cr释放细胞毒性测定中，所述试剂或抗体增强和/或恢复nk细胞的细胞毒性，在所述细胞毒性测定中将表达siglec-9的nk细胞从人类供体纯化，并且与表达siglec-9的唾液酸配体的靶细胞一起温育。
24.根据前述权利要求中任一项所述的试剂或抗体，其中所述抗体能够中和由人modc表达的siglec-9多肽的抑制活性，所述人modc在其表面处带有与唾液酸以顺式相互作用方式进行接合的siglec-9多肽。
25.根据前述权利要求中任一项所述的试剂或抗体，其中所述抗体缺乏结合到cd16人fcγ受体的能力。
26.根据前述权利要求中任一项所述的试剂或抗体，其中所述抗体缺乏结合到人cd16a、cd16b、cd32a、cd32b和cd64的能力。
27.根据前述权利要求中任一项所述的试剂或抗体，其中所述抗体基本上不阻断人siglec-9多肽与其唾液酸配体之间的相互作用。
28.根据权利要求27所述的试剂或抗体，其中所述唾液酸配体包括neu5aca2-3galb1-4glcnacb。
29.根据权利要求1到28所述的试剂或抗体，其中所述抗体基本上阻断人siglec-9多肽与其唾液酸配体之间的相互作用。
30.根据权利要求29所述的试剂或抗体，其中所述抗体(a)基本上阻断人siglec-9多肽与neu5aca2-3galb1-4glcnacb之间的相互作用，并且(b)基本上阻断人siglec-9多肽与6'-唾液乳糖之间的相互作用。
31.根据前述权利要求中任一项所述的试剂或抗体，其中当使所述nk细胞与在所述靶细胞表面上带有所述siglec的配体的靶人类细胞接触时，所述抗体或试剂在从人类供体纯化的siglec表达性nk细胞中的引起细胞毒性和/或与细胞毒性相关联的标志物增加。
32.根据前述权利要求中任一项所述的试剂或抗体，其中所述抗体或试剂的特征在于与结合到seqidno:2的野生型siglec-9多肽相比，减少了与在残基k131和/或h132处具有突变的siglec-9多肽的结合，其中氨基酸残基是参考seqidno:2的所述siglec-9多肽来指示的。
33.根据前述权利要求中任一项所述的试剂或抗体，其中所述抗体或试剂包括以下中的任一个的重链可变区和轻链可变区组合：mabah0l0、mabah0l1、mabah0l2、mabah1l0、mabah1l1、mabah1l2、mabah2l0、mabah2l1、mabah2l2、mabah3l0、mabah3l1或mabah3l2。
34.根据权利要求1到32中任一项所述的抗体或试剂，其中所述抗体或试剂包括以下中的任一个的重链可变区和轻链可变区组合：mabbh0l0、mabbh0l1、mabbh0l2、mabbh1l0、mabbh1l1、mabbh1l2、mabbh2l0、mabbh2l1、mabbh2l2、mabbh3l0、mabbh3l1、mabbh3l2、mabbh4l0、mabbh4l1、mabbh4l2、mabbh5l0、mabbh5l1或mabbh5l2。
35.根据权利要求1到32中任一项所述的抗体或试剂，其中所述抗体或试剂的特征在于与结合到seqidno:2的野生型siglec-9多肽相比，减少了与在残基s47、h48、g49、w50、i51、y52、p53和/或g54处具有突变的siglec-9多肽的结合，其中氨基酸残基是参考seqidno:2的所述siglec-9多肽来指示的。
36.根据权利要求1到32或35中任一项所述的抗体或试剂，其中所述抗体或试剂包括以下中的任一个的重链可变区和轻链可变区组合：mabdh0l0、mabdh0l1、mabdh0l2、mabdh1l0、mabdh1l1、mabdh1l2、mabdh2l0、mabdh2l1或mabdh2l2。
37.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或试剂，其中所述抗体或试剂是具有被修饰成减少所述fc结构域与fcγ受体之间的结合的fc结构域的抗体。
38.根据权利要求1到36所述的抗体，其中所述抗体或试剂是抗体片段，任选地是选自以下的片段：fab、fab'、fab'-sh、f(ab')2、fv、双抗体、单链抗体片段或包括多个不同抗体片段的多特异性抗体。
39.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或试剂，其中所述抗体缀合或共价结合到可检测部分。
40.一种药物组合物，其包括根据前述权利要求中任一项所述的抗体或试剂以及药学上可接受的载剂。
41.一种试剂盒，其包括根据前述权利要求中任一项所述的抗体或试剂，任选地进一步包括特异性识别根据前述权利要求中任一项所述的抗体的标记的第二抗体。
42.一种核酸，其编码根据权利要求1到39中任一项所述的抗体或抗原结合结构域的重链和/或轻链。
43.一种重组宿主细胞，其产生根据权利要求1到39中任一项所述的抗体或抗原结合结构域。
44.一种用于治疗或预防有需要的患者的疾病的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的根据权利要求1到38中任一项所述的抗体或根据权利要求40所述的组合物。
45.根据权利要求44所述的方法，其中所述疾病是癌症，任选地是特征在于表达st3gal1和/或st3gal6酶的癌症。
46.一种用于调节受试者中的cd56暗淡nk细胞和/或cd56明亮nk细胞和/或cd8 t细胞的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1到38中任一项所述的抗体或根据权利要求40所述的组合物。
47.一种用于调节单核细胞衍生的细胞和/或淋巴细胞，任选地cd56暗淡nk细胞、cd56明亮nk细胞和/或cd8 t细胞的活性的体外方法，所述方法包括使表达siglec7和/或siglec-9的由单核细胞衍生的细胞和/或淋巴细胞与根据权利要求1到38中任一项所述的抗体或根据权利要求40所述的组合物接触。
48.一种用于评估来自患有疾病的受试者的nk细胞的活性的体外方法，所述方法包括从受试者获得包括nk细胞的生物样品，使所述细胞与根据权利要求1到39中任一项所述的抗体接触，并且评估所述抗体是否调节所述nk细胞的活性。
49.一种用于识别淋巴细胞，任选地cd56暗淡nk细胞、cd56明亮nk细胞和/或cd8 t细胞的方法，所述方法包括从受试者获得包括细胞的生物样品，使所述细胞与根据权利要求1到23中任一项所述的抗体接触，并且评估所述抗体是否结合所述细胞。
50.根据权利要求47到49所述的方法，其中所述细胞存在于从患有疾病，任选地癌症的受试者获得的生物样品中。
51.一种用于选择患有响应于用根据权利要求1到38中任一项所述的抗体或试剂或根据权利要求40所述的组合物治疗的癌症的受试者的方法，所述方法包括确定癌细胞在所述受试者中是否表达siglec-7或siglec-9的配体，任选地癌细胞是否表达高水平的配体siglec-7或siglec-9，siglec-7或siglec-9的一个或多个唾液酸配体的表达或siglec-7或siglec-9的高水平的一个或多个唾液酸配体指示响应受试者。
52.一种用于选择患有响应于用根据权利要求1到38中任一项所述的抗体或试剂或根据权利要求40所述的组合物治疗的癌症的受试者的方法，所述方法包括确定癌细胞在所述受试者中是否表达st3gal1和/或st3gal6酶(或st3gal1和/或st3gal6酶活性)，st3gal1和/或st3gal6酶的表达或高水平的st3gal1和/或st3gal6酶(或st3gal1和/或st3gal6酶活性)指示响应受试者。
53.根据权利要求50到52所述的方法，其进一步包括向响应受试者施用根据权利要求1到38中任一项所述的抗体或根据权利要求40所述的组合物。
技术总结Siglec‑9在免疫细胞中具有抑制活性。本发明涉及试剂，其结合人Siglec‑9，并且中和其抑制活性。此类试剂可以用于治疗癌症或传染病。
技术研发人员：S·科纳;B·罗西;N·瓦格曼;L·高蒂尔
受保护的技术使用者：先天制药公司
技术研发日：2018.07.09
技术公布日：2020.06.09
